cDNA از mRNA موجود در هسته تولید میشود و در نتیجه تنها حاوی ژنهای بیان شدهیکارگانیسماست.(اینترون ها حذف شده است). به همین دلیل حدف اینترون ها به آسانی در یک سلول باکتریایی بیان می شود شود. از آنجایی که محصولات ژنها از این طرق راحتتر شناخته می شوند، اطلاعات کتابخانههای cDNA یک ابزار قدرتمند و مفیدبرای بررسی بر بیان ژن ها و کل کتابخانه می باشدد؛ اما این کتابخانهها فاقد اطلاعات مربوط به افزاینده (enhancers)، اینترون و دیگر عناصر تنظیمی که در یک کتابخانه DNA ژنومی یافت میشوند، میباشند.ساخت cDNA از mRNA سلول یوکاریوتی با استفاده از آنریم ترانس کریپتاز معکوس)آنزیم رونوشت بردار معکوس( انجام میشود. هنگامی که mRNA خالص سازی میشودoligo-Dt)توالی کوتاهی از نوکلئوتید دئوکسی-تیمیدین( به عنوان یک پرایمر مکمل به دم پلی Aمتصل شده و یک انتهای آزاد ’۳-OH فراهم میکند که میتواند توسط آنزیم ترانس کریپتاز معکوس طویل شود تا رشته DNA مکمل را ایجاد کند. اکنون، mRNA توسط یک آنزیم RNase جدا میشود تا یک cDNA تک رشتهای (sscDNA) باقی بماند. از آنجایی که میزان اطلاعات هنگام تولید مثل ژنوم یوکاریوتی کاهش مییابد، کتابخانههای cDNA معمولاً هنگام تولید مثل ژنوم یوکاریوتی استفاده میشوند، . کتابخانههای cDNA برای بیان ژنهای یوکاریوتی در پروکاریوتها استفاده میشوند. پروکاریوتها فاقد اینترون در DNAی خود هستند و به همین دلیل فاقد آنزیمهایی هستند که میتوانند اینترونها را در طول فرایند رونویسی قطع کنند. cDNA هیچ اینترونی ندارد و بنابراین میتواند در سلولهای پروکاریوتی بیان شود. کتابخانههای cDNA برای روش ژنتیک معکوس که در آن اطلاعات ژنومی اضافی کمتر مورد استفاده قرار میگیرد، بسیار مناسب هستند. همچنین، برای جداسازی متعاقب ژنی که آن mRNA را کد میکند مفید است. به طور کلی برای بررسی بیان ژن ها از CDNA استفاده می شود.
سنتز cDNA
cDNA از mRNA موجود در هسته تولید میشود و در نتیجه تنها حاوی ژنهای بیان شدهیکارگانیسماست.(اینترون ها حذف شده است). به همین دلیل حدف اینترون ها به آسانی در یک سلول باکتریایی بیان می شود شود. از آنجایی که محصولات ژنها از این طرق راحتتر شناخته می شوند، اطلاعات کتابخانههای cDNA یک ابزار قدرتمند و مفیدبرای بررسی بر بیان ژن ها و کل کتابخانه می باشدد؛ اما این کتابخانهها فاقد اطلاعات مربوط به افزاینده (enhancers)، اینترون و دیگر عناصر تنظیمی که در یک کتابخانه DNA ژنومی یافت میشوند، میباشند.ساخت cDNA از mRNA سلول یوکاریوتی با استفاده از آنریم ترانس کریپتاز معکوس)آنزیم رونوشت بردار معکوس( انجام میشود. هنگامی که mRNA خالص سازی میشودoligo-Dt)توالی کوتاهی از نوکلئوتید دئوکسی-تیمیدین( به عنوان یک پرایمر مکمل به دم پلی Aمتصل شده و یک انتهای آزاد ’۳-OH فراهم میکند که میتواند توسط آنزیم ترانس کریپتاز معکوس طویل شود تا رشته DNA مکمل را ایجاد کند. اکنون، mRNA توسط یک آنزیم RNase جدا میشود تا یک cDNA تک رشتهای (sscDNA) باقی بماند. از آنجایی که میزان اطلاعات هنگام تولید مثل ژنوم یوکاریوتی کاهش مییابد، کتابخانههای cDNA معمولاً هنگام تولید مثل ژنوم یوکاریوتی استفاده میشوند، . کتابخانههای cDNA برای بیان ژنهای یوکاریوتی در پروکاریوتها استفاده میشوند. پروکاریوتها فاقد اینترون در DNAی خود هستند و به همین دلیل فاقد آنزیمهایی هستند که میتوانند اینترونها را در طول فرایند رونویسی قطع کنند. cDNA هیچ اینترونی ندارد و بنابراین میتواند در سلولهای پروکاریوتی بیان شود. کتابخانههای cDNA برای روش ژنتیک معکوس که در آن اطلاعات ژنومی اضافی کمتر مورد استفاده قرار میگیرد، بسیار مناسب هستند. همچنین، برای جداسازی متعاقب ژنی که آن mRNA را کد میکند مفید است. به طور کلی برای بررسی بیان ژن ها از CDNA استفاده می شود.
نقد و بررسیها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.