توضیحات

محیط کشت میکروبی Marine Agar برای کشت ، جداسازی و شمارش باکتری‌های معدنی هتروتروف توصیه می‌شود. میکروارگانیسم‌ها در یک محیط آبی ممکن است در تمام اعماق، اعم از ناحیه سطح تا پایین‌ترین قسمت اقیانوس حضور داشته باشند. بالاتری لایه و پایین‌ترین رسوبات، بیشترین مراکز تجمع میکروارگانیسم‌ها هستند. میکروارگانیسم‌های معدنی برای چرخه‌های اکولوژیکی حیاتی هستند، زیرا پایه و اساس بسیاری از زنجیره‌های غذایی را شکل می‌دهند. محیط کشت (Marine Agar 2216 (Zobell Marine Agar، ترکیباتی دارد که از ترکیبات آب دریا تقلید می‌کند و بنابراین به باکتری‌های معدنی کمک می‌کنند که به فراوانی رشد کنند در این محیط. پس این محیط کشت برای رشد باکتری‌های معدنی طراحی شده است. این محیط کشت حاوی مواد مغذی ای می‌باشد که برای رشد باکتری‌های معدنی ضروری می‌باشد. این محیط کشت همانند آب دریا مواد معدنی و پپتون و عصاره مخمر دارد که منبعی از مواد مغذی برای باکتری‌های معدنی می‌باشد.

ترکیبات محیط کشت میکروبی Marine Agar

• پپتون۵٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• عصاره مخمر ۱٫۰۰۰گرم بر لیتر
• سیترات آهن ۰٫۱۰۰ گرم بر لیتر
• سدیم کلراید ۱۹٫۴۵۰ گرم بر لیتر
• منیزیم کلرید ۸٫۸۰۰ گرم بر لیتر
• سدیم سولفات ۳٫۲۴۰ گرم بر لیتر
• کلسیم کلراید ۱٫۸۰۰ گرم بر لیتر
• پتاسیم کلراید۰٫۵۵۰ گرم بر لیتر
• سدیم بی‌کربنات ۰٫۱۶۰ گرم بر لیتر
• پتاسیم برماید ۰٫۰۸۰ گرم بر لیتر
• استرانسیوم کلراید ۰٫۰۳۴ گرم بر لیتر
• بوریک اسید ۰٫۰۲۲ گرم بر لیتر
• سدیم سیلیکات ۰٫۰۰۴ گرم بر لیتر
• آمونیوم نیترات ۰٫۰۰۱۶ گرم بر لیتر
• دی سدیم فسفات ۰٫۰۰۸ گرم بر لیتر
• سدیم فلوریت ۰٫۰۰۲۴ گرم بر لیتر
• آگار ۱۵٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• PH نهایی در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد باید حدود ۷٫۶ باشد.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت 

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود .
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.