آنزیم Pfu پلی مراز پیشگامان انتقال ژن

Pfu پلیمراز آنزیمی مقاوم به حرارت است که برای تکثیر قطعات DNA مورد استفاده قرار می گیرد. این آنزیم واکنش پلیمریزاسیون نوکلئوتیدها را در جهت ´۵ به ´۳ کاتالیز می کند. آنزیم Pfu پلیمراز همچنین دارای فعالیت اگزونوکلئازی در جهت ´۳ به ´۵ نیز می باشد. خاصیت تصحیح اشتباه (proofreading)آنزیم را قادر می سازد اشتباهات خود را در حین انجام واکنش پلیمریزاسیون اصلاح کند.

آنزیم Pfu پلیمراز به صورت نوترکیب از ژن پلیمراز باکتری Pyrococcus furiosus در E.coli تولید شده است.هر واحد (unit) آنزیم Pfu پلیمراز واکنش افزوده شدن مقدار nmole ۱۰ نوکلئوتید (dNTP) را در DNA دو رشته ای در مدت ۳۰ دقیقه در دمای ° C ۷۲ کاتالیز می کند.

کاربردها

• PCR با صحت عملکرد بالا (High fidelity PCR)
• تولید محصولات PCR برای فرآیندهای کلونینگ و بیان
• RT PCR برای کلونینگ cDNA و بیان
• تولید محصولات PCR با انتهای آزاد (blunt end)
• موتاسیون‌های معطوف به جایگاه (site directed mutagenesis)

شرایط نگهداری آنزیم : در دمای ° C ۲۰- نگهداری شود. از سرد و گرم شدن (freeze – thaw) زیاد پرهیز گردد.