توضیحات

برای مطالعه ی پروتئین ها از روش های تجربی و محاسباتی انجام می شود. مطالعات تجربی نیازمند جدا سازی پروتئین ها و خالص سازی آن ها می باشد که برای این منظور از تکنیک های مختلفی استفاده می شود. اگر پروتئین مورد نظر، توسط میکروارگانیسم‌ها به محیط اطراف آزاد نشود، در این صورت اولین مرحله خالص‌سازی، شکستن سلول‌های واجد پروتئین است. بر اساس میزان شکنندگی پروتئین‌ها و پایداری سلول می‌توان از یکی از روش‌های زیر جهت استخراج استفاده کرد:
1. فریز کردن و ذوب کردن پی در پی
2. سونیکاسیون (sonication)
3. هموژنیزه کردن تحت فشار بالا
4. هموژنیزه کردن از راه (bead mill)
5. نفوذپذیر کردن با استفاده از مواد دترجنت مانند تریتون X-100 یا آنزیم‌ها (مانند لیزوزیم)

برای خالص سازی پروتئین از تکنیک های زیر استفاده می شود:
1. جداسازی پروتئین‌ها از طریق وارد کردن آن‌ها در یک ژل (pH graded gel) یا ستون تعویض یونی
2. جداسازی پروتئین‌ها بر اساس اندازه یا وزن مولکولیشان که به این منظور از کروماتوگرافی تعویض اندازه (size exclusion chromatography) یا SDS-PAGE استفاده می‌شود.
3. جداسازی پروتئین‌ها بر اساس میزان قطبیت و آبگریزشان از طریق کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا high performanceliquid chromatography)) یا کروماتوگرافی فاز معکوس(reversed-phase chromatography)
پس از خالص سازی پروتئین باید بواسطه ی روش لیوفیلیزه کردن و یا روش اولتراسانتریفیوژ تغلیظ گردد. سپس برای ارزیابی پروتئین از روش SDS Page استفاده می شود. در صورت وجود آنتی بادی اختصاصی از روش وسترن بلات که روشی تاییدی برای پروتئین می باشد استفاده می شود.

دیدگاهها

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

اولین نفری باشید که دیدگاهی را ارسال می کنید برای “استخراج پروتئین + تعیین OD”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.