توضیحات

مکانیسم آن به این صورت است که فنول باعث رسوب DNA و پروتئین می‌شود سپس گوانیدین باعث جداسازی RNA کل می‌شود. حجم کلی محلول 25ml  است.

روش کار:

  • برداشت بافت

اولین مرحله از استخراج RNA جداسازی بافت می‌باشد. به  این منظور می‌توان از پروتئازها استفاده نمود. گاهی نیز در محیط آزمایشگاه بافت‌های آماده در ته فلاسک وجود دارند که برای جداکردن آنها ازتریپسین و EDTA استفاده می‌شود.

  • همگن‌سازی

در دومین مرحله باید RNA و دیگر اجزای سلولی را از محاصره غشایی خارج نموده که بدین منظور باید مجموعه سلولی را تخریب کرده و ترکیبی همگن بدست آورد RNX-Plus یا Trizol در این مرحله مورداستفاده قرار می‌گیرند.

  • جداسازی فازها

در این مرحله RNA را از DNA و پروتئین‌های سلولی جدا می‌شود. پس از اضافه نمودن کلروفرم به نمونه آن را تحت شرایط ویژه‌ای سانتریفیوژ کرده که در پایان، سه‌فاز تفکیک شده را حاصل می‌نماید. فاز زیرین مربوط به پروتئین‌ها، فاز میانی مربوط به DNA و فاز رویی ای مربوط به RNA می‌باشد.

  • رسوب سازی RNA

در این مرحله پس از انتقال فاز رویی ای  به لوله‌ای دیگر با استفاده از ایزوپروپانول و سپس سانتریفیوژ RNA را رسوب می‌دهیم.

  • شستشوی RNA

شستشوی رسوب RNA با استفاده از اتانول ۷۵٪ مرحله  پنجم را تشکیل می‌دهد.

نکته: در استخراج DNA شستشو با الکل ۷۰٪ انجام می‌شود ولی در استخراج RNA با الکل ۷۵٪

  • محلول‌سازی RNA

انحلال رسوب RNA با استفاده از DEPC treated Water ششمین مرحله از استخراج RNA می‌باشد.

  • تجزیه‌وتحلیل RNA

آخرین مرحله سنجش صحت استخراج RNA می‌باشد که از دو طریق اسپکتروسکوپی یا الکتروفورز کمیت یا کیفیت کار مورد ارزیابی قرار می‌گیرد.

روش نگهداری:

  • 2-8 درجه سانتیگراد
  • برای نگهداری طولانی‌مدت، در دمای -20 درجه نگهداری شود.

معرف‌های موردنیاز که درون کیت موجود نمی‌باشد

کلروفرم، ایزوپروپانول، اتانول %75، DEPC با آب تصفیه شده

موارد احتیاط:

  • در صورت تماس، فوراً چشم‌ها یا پوست را با مقدار زیادی آب به مدت حداقل 15 دقیقه شست‌وشو دهید.
  • هنگام استفاده حتماً از دستکش استفاده کنید محلول  حاوی ماده سمی و تحریک‌کننده است.

 

 

دیدگاهها

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

اولین نفری باشید که دیدگاهی را ارسال می کنید برای “محلول استخراج RNA سیناکلون”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.