محیط کشت BROLAC آگار – بروموتیمول بلو لاکتوز

محیط کشت بروموتیمول بلو لاکتوز آگار (BROLAC Agar; Bromothymol-blue Lactose Agar)، یک محیط انتخابی برای جداسازی باکتری‌های گرم منفی از ادرار و مدفوع است. واکنش با لاکتوز اهمیت زیادی برای جداسازی اولیه از انتروباکتریاسه از نمونه‌های بالینی دارد. عصاره گوشت، پپتون ماهی و پپتون، مواد مغذی ضروری برای متابولیسم باکتری‌ها را فراهم می‌کنند. لاکتوز یک منبع کربوهیدرات قابل تخمیر، برای باکتری‌های روده‌ای را فراهم می‌کند. بروموتیمول بلو شناساگر pH برای نشان‌دادن تولید اسید به سبب تخمیر کربوهیدرات است. در pH اسیدی محیط به رنگ زرد تبدیل می‌شود و رنگ زرد به کلنی نیز می‌رسد. محدوده قلیایی رنگ محیط را به آبی تغییر می‌دهد. کلرید سدیم سبب حفظ تعادل اسمزی می‌شود و سدیم لوریل سولفات مهارکننده‌های ارگانیسم‌های گرم مثبت است.

فرمولاسیون محیط کشت بروموتیمول بلو لاکتوز آگار

• Meat extract 000
• Fish peptone 000
• Peptone 000
• Sodium chloride 500
• Sodium thiosulphate 000
• Sodium lauryl sulphate 150
• Lactose 000
• Bromo thymol blue 083
• Agar 000
• Final pH ( at 25°C) 7.4±۰٫۲

روش نگهداری محیط BROLAC Agar

دمای زیر ۳۰ درجه سانتیگراد در ظرف محکم دربسته نگهداری شود. محیط تهیه شده در دما ۲-۸ درجه سانتیگراد نگهداری شود.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.