محیط کشت ایندول نیتریت – Indole Nitrite

محیط کشت میکروبی Indole Nitrite Medium که به نام محیط کشت ایندول نیترات نیز شناخته می شود، مناسب برای تشخیص میکروارگانیسم به وسیله احیاء نیترات و تست ایندول به کار می رود. محیط کشت ایندول نیترات برای ایفای نقشی دو گانه در تشخیص تولید محصولات نیترات و احیاء نیترات توسط طیف گسترده ای از میکروارگانیسم ها ایفا می کند. بر اساس محتویات مواد مغذی این محیط کشت، رشد میکروارگانیسم های هوازی، میکروآئروفیل و بی هوازی های گوناگون و اجباری را حمایت می کند. محیط کشت ایندول نیتریت می تواند برای تست های نیتریت با اعضای انتروباکتریاسه به کار رود ولی این مسئله برای تست ایندول با این ارگانیسم ها توصیه نمی شود، زیرا این ارگانیسم ها نیترات را به نیتریت احیاء می کند که موجب جلوگیری از تشخیص ایندول می شود. محلول ۱% تریپتوفان محیط کشتی برای تست انتخابی ایندول با باسیل های روده می باشد.

اصول تشخیص محیط ایندول نیترات

کازئین پپتون محتوی تریپتوفان می باشد که به وسیله میکروارگانیسم های مشخصی مورد حمله قرار می گیرد که این امر باعث تولید ایندول می شود. این اتفاق با افزودن عوامل شیمیایی به محیط کشت ۱۸ تا ۴۸ ساعته قابل دیدن می باشد.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.