محیط کشت LB Broth Miller

محیط کشت LB Broth Miller چیست و چه کاربردی دارد؟

محیط کشت LB Broth Miller برای کشت و نگه داری نژادهای نوترکیب اشریشیا کلی کاربرد دارد و همچنین شاید بتوان از آن برای کشت میکروارگانیسم های سخت پسند غیر ویژه هم استفاده کرد. این محیط کشت به خاطر وجود مقدار دو برابر سدیم کلراید در مقایسه با محیط کشت اصلی ای که به وسیله Lennox طراحی شد برای کشت و نگه داری نژادهای نوترکیب اشریشیا کلی کمی متفاوت تر است. محیط کشت LB Broth Miller از نظر مواد غذایی برای رشد خالص نژادهای نوترکیب ، غنی تر می باشد. نژاد ها از اشریشیا کلی K12 گرفته شده اند که در سنتز ویتامین B ناتوان می باشند که آن هم به دلیل جهش ایجاد شده است برای اینکه بتوانند نژادهای اگزوتروفیکی ایجاد کنند که قادر به رشد در محیطی که کمبود مواد غذایی دارد، نباشند. کازئین هیدرولیز آنزیمی شده ، پپتید و پپتون را فراهم می کند ، درحالیکه کمپلکس ویتامین B به وسیله عصاره مخمر فراهم می شود.سدیم کلراید ، یون سدیم را فراهم می کند که برای انتقال و ترابری بین ترکیبات لازم است و همچنین تعادل اسمزی محیط را هم حفظ می کند.

ترکیبات محیط کشت LB Broth Miller :

• کازئین هیدرولیز آنزیمی ۱۰٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• عصاره مخمر ۵٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• سدیم کلراید ۱۰٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• PH نهایی در دمای ۲۵ درجه سانتی گراد باید حدود ۷٫۵ باشد.

ظاهر محیط کشت:

رنگ زرد مایل به کهربایی که شفاف می باشد.

طرز تهیه کلی محیط های کشت :

همانطوریکه می دانید محیطهای کشت به سه دسته جامد ، نیمه جامد ، مایع تقسیم می شوند . محیطهای مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است . مثلاً حدود ( ۲/۰%) و محیط های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم وبالاخره محیط های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .

برای ساختن محیط های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌ کنیم.

در روی این شیشه ها ترکیب محیط بطور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.

مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده ودر مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته اید اضافی نموده و آنرا کاملاً‌ حل نمائید.

سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.

تا زمان جوشیدن آنرا چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و بمدت یک دقیقه بجوشد.

پس از آنکه مایع بجوش آمد ، آنرا برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .

ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.

در ادامه…

بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود .

سپس در حالیکه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.

محتویات را درون پلیت های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.

بعد پلیت ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند وازتکان دادن آن خودداری نمائید.

پس از جامد شدن محیطهای کشت نوترینت آگار را جمع کرده ودر c37⁰ بمدت ۲۴ ساعت قرار دهید.

اگر محیط ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.

در یخچال ۴ درجه سانتی گراد قرار می‌دهید .

نکته

طرز ساختن سایر محیطهای کشت، همینطور می‌باشد.

منتهی بعضی از محیطهای جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند.

این محیطها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند .

برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود میکنیم.

جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم .

مجموعه وندیداز مفتخر است با ارائه محیط کشت

با بهترین قیمت و کیفیت در خدمت جامعه آزمایشگاهی کشور و پیشرفت آن باشد

لینک های مفید:

• مشاهده محصولات گروه میکروبی
• محصولات سلولی