cDNA چیست ؟

رشته DNA مکمل یا cDNA ، رشته هایی از جنس DNA بوده که در طی واکنشی به نام نسخه برداری معکوس  (reverse transcription) از روی رشته های RNA (به طور خاص mRNA)،  ساخته می شود و چون توالی آن ها مکمل mRNA است  به آن Complementry DNA یا cDNA گفته می‌شود.

مکانیسم ساخت cDNA

هرچند مکانیسم‌ های متعددی جهت سنتز DNA  مکمل پیشنهاد می شود ولی سنتز آن از روی mRNA، با کمک از آنزیم رونوشت بردار معکوس، رایج‌ترین روش جهت تهیه آن می باشد.  هنگامی که mRNA خالص سازی شد ،oligo-dT  (توالی کوتاهی از نوکلئوتید دئوکسی-تیمیدین) به عنوان پرایمر مکمل به دم پلی آدنین متصل شده تا انزیم رونوشت بردار معکوس عملکرد خود را شروع کند، به این صورت که ضمن حرکت در امتداد رشته mRNA، دئوکسی ریبونوکلئوتید مکمل هریک از ریبونوکلئوتیدهای mRNA را از طریق برقراری پیوند هیدروژنی مقابل هم قرار دهد و ضمن تشکیل یک رشته  هیبرید نهایتاً منجر به سنتز cDNA می‌گردد.  حالmRNA  توسط یک آنزیم RNase جدا می‌شود تا یک cDNA تک رشته‌ای (sscDNA) باقی بماند. این sscDNA با کمک DNA پلیمراز به یک DNA دو رشته‌ای تبدیل می‌شود.

کاربرد cDNA

PCR، کشف ژن، تجزیه و تحلیل و شبیه سازی  mRNA، کلون کردن ژن در سلول‌ها، به‌ عنوان پروب در آنالیز ژن‌ها و بررسی سطح بیان ژن‌ ها به صورت کمی

مشخصات کیت سیناکلون:

این کیت از برند سیناکلون که به طور ویژه برای سنتز cDNA و استفاده از آن در 50 واکنش PCR طراحی شده است. نمونه اولیه با استفاده ازآنزیم  M-MuLV Reverse Transcriptase  ، پرایمرهای  Oligo d(T)  یا Random Hexamer  باعث سنتز اولین رشته DNAمی شود. عدم حضور RNase H باعث افزایش کارایی سنتز cDNA از رشته RNA شده که ناشی از جدا نشدن هیبرید DNA است. مهار کننده RNase ارائه شده به همراه کیت، به طور موثری از RNA در برابر تخریب تا دمای 55 درجه سانتی گراد محافظت می کند.

انتخاب پرایمر های مختلف Oligo d(T)  یا Random Hexamer  و همچنین آنزیم های متفاوت به نسبت طول الگوی سنتز شده در توالی هایTaq DNA Polymerase  و Max Taq DNA Polymerase   بستگی دارد.

محتویات کیت:

Kit Components(50 reactions):

• M-MuLV Reverse Transcriptase (200u/µl)                            10000u
• RNase Inhibitor (40u/µl)                                                     1000u
• 5X Buffer M-MuLV                                                              200 µl
• 10mM dNTPs mix                                                                 50 µl
• Oligod(T)18                                                                         50 μl
• Random hexamer                                                                 50 μl
• DEPC-treated water                                                               1 ml

شرایط نگه داری کیت :

• در دمای 20- درجه تا تاریخ انقضا، کیت پایدار است.
• جهت حمل و نقل کیت حتما از یخ خشک یا مرطوب استفاده شود.