توضیحات

وسترن بلات یک روش آزمایشگاهی برای تشخیص مولکول‌های خاص پروتئین از میان مخلوطی از پروتئین‌ها که به طور گسترده در زیست‌شناسی مولکولی و ایمنی‌زایی مورداستفاده قرار می‌گیرد. این مخلوط می‌تواند شامل تمام پروتئین‌های مرتبط با یک بافت یا سلول خاص باشد.  بعضاً به این تکنیک ایمونوبلات هم گفته می‌شود. از روش‌های به‌کاررفته در این تکنیک می‌توان به SDS-PAGE  و الکتروفورز اشاره کرد.  ابتدا پروتئین توسط لایة SDS استخراج انجام شده بعد توسط تکنیک الکتروفورز به کمک نیروی الکتریکی جدا شده و بعد از رنگ‌آمیزی قابل‌مشاهده است.

مکانیسم

تکنیک بلات شامل ۳ مرحله می‌باشد :

• جداسازی پروتئین‌ها بر اساس اندازه
• انتقال به غشا جامد
• نشان‌دار کردن پروتئین هدف با آنتی‌بادی اولیه و ثانویه مناسب جهت تشخیص

در ابتدا مولکول‌های پروتئین با استفاده از تکنیک SDS-PAGE جدا می‌شوند و سپس جهت تشخیص نهایی و دقیق پروتئین موردنظر از تکنیک وسترن‌بلات استفاده می‌شود. در این تکنیک ژل SDS-PAGE را با یک غشا از جنس نیتروسلولز و یا PVDF جفت نموده و جهت جریان دستگاه وسترن‌بلات را جوری تنظیم نموده که پروتئین‌ها از ژل SDS PAGE به سمت غشا حرکت نمایند. در اغلب موارد انتقال پروتئین از غشا به ژل با کمک نیروی الکتریکی صورت می‌گیرد که این نوع انتقال به انتقال الکتروفورزی معروف است. انتقال الکتروفورزی به دو صورت انجام شده:

• انتقال تر: انتقال در تانک
• انتقال روش نیمه‌خشک

البته می­توان به طریق انتشار با خاصیت مویینگی یا پمپ خلا نیز پروتئین‌ها را انتقال داد. پس از انتقال پروتئین‌ها به غشا, با استفاده از آنتی‌بادی مخصوص پروتئین هدف، آن را رنگ‌آمیزی کرده تا قابل تشخیص باشد.

کاربرد وسترن‌بلات و کیت

• ارزیابی اندازه پروتئین
• اندازه‌گیری میزان بیان پروتئین
• بررسی خواص پروتئين

محتویات کیت وسترن‌بلات

• کاغذ باقدرت جذب بالا
• غشای انتقال (غشاهای PVDF)
• بافر آند
• بافر کاتد
• حاوی مواد لازم برای تهيه ژل پلی‌اکریل‌آمید, رنگ‌آمیزی کماسی و بافر ترانسفر

مطالب مرتبط

None found