کیت Real-Time PCR برای بررسی microRNA10b انسانی

محتویات کیت microRNA10b انسانی:

• محتویات مستر میکس سنتز CDNA:

پرایمر loopedمخصوص U6، پروب ، 50 میلی مولار Mgcl2 ، Reverse transcriptase، 10 میلی مولار dNTP ، بافر و آب

• مستر میکس Real time :

پرایمر، پروب ، 50 میلی مولار mgcl2 ، Taq پلی مراز ، 10 میلی مولار dNTP ، بافر میکس و آب

• استاندارد 1 (10000 کپی / ML) ، استاندارد2 ( 1000 کپی / ML ) ، استاندارد 3 (100کپی / ML ) و کنترل منفی

مخلوط آماده سازی :

• 10  میکرولیتر مستر میکس را به هر میکروتیوب اضافه کنید.
• 5 میکرولیترDNA ویروسی ، کنترل مثبت و کنترل منفی به هر میکروتیوب بیافزایید، به مدت 10 ثانیه مخلوط  و اسپین نمایید.

برنامه PCR :

سنتز CDNA :پنجاه درجه به مدت 30 دقیقه

دناتوراسیون آغازی : 95 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه : در این مرحله Taq پلی مراز فعال شده و DNA ویروسی دناتوره می شود.

45 سیکل : 95 درجه سانتی گراد به مدت15  ثانیه ، 55  درجه سانتی گراد به مدت10  ثانیه ، 72 درجه سانتی گراد به مدت 15 ثانیه

آشکار سازی فلورسنت : در green (FAM) channel و در 55 درجه سانتی گراد

آنالیز Real time :

در صورتی که بعد از 40 سیکل نمونه مثبت بود ، تست باید دوباره انجام شود.

نمونه: پلاسما ، خون کامل ، بافت

نکاتی درباره microRNA10b انسانی :

میکرو RNA ، RNA های کوچک ( 20 تا 24 نوکلئوتیدی ) non-coding هستند که در تنظیمات پس از رونویسی ژن در موجودات پر سلولی با تاثیر بر روی پایداری و ترجمه mRNA نقش ایفا می کنند. MiRNAs توسط RNA پلی مراز II به عنوان بخشی از cap و polyadenilation رونویسی می شود . miRNA اولیه (pri-miRNAs) هم می تواند کد کننده پروتئین باشد و هم نباشد.

اهمیت بالینی :

مطالعات نشان داده است که سلول های بدون miRNA در سرم و پلاسمای خون افراد مبتلا به سرطان با بیان ویژه در گردش هستند. از این رو miRNA ها پتانسیل خوبی برای تبدیل به بیومارکر در تشخیص سرطان دارند.

مشاهده سایر محصولات مرتبط