پتانسیلیک واحد آنزیم، معادل یک میلی مول لوسین را ظرف 5 ساعت در 37 درجه سانتیگراد با pH 7.5 از کلاژن آزاد می کند. فعالیت محصول کلاژناز نوع 1 بالاتر از 125 واحد بر میلی گرم باشد.

روش استفاده از آنزیم کلاژناز ایده زیست نوترکیب

• آماده سازی محلول استوک و محلول کاری 

  1. آنزیم لیوفیلیزه غیراستریل را در HBSS (حاوی کلسیم و منیزیم) یا PBS (حاوی کلسیم و منیزیم) یا DMEM/F12 حل کنید. محلول را توسط فیلتراسیون مخصوص کشت سلول استریل کنید. کلاژناز خام اغلب در غلظت های 1/0 تا 5/0 درصد (W / V) یا 50 تا 100 واحد بر میلی لیتر استفاده کنید. بلافاصله پس از تهیه، محلول را استفاده کنید یا در فریزر قرار دهید. بلافاصله قبل از استفاده، آن را در دمای یخجال ذوب کنید.

• تجزیه بافت برای استفاده از آنزیم کلاژناز ایده زیست

  1. بافت را با استفاده از یک اسکالپل یا قیچی استریل تکه تکه کنید.
  2. بافت را چندین بار در HBSS بشویید.
  3. قطعات بافت در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار دهید. با استفاده از یک سکوی غلتان و اضافه کردن CaCl2 3 میلی مولار، کارایی فرایند را افزایش دهید.

• انتشار در ارگان

  1. دایجست را تا 37 درجه سانتیگراد گرم کنید و انتشار در بافت در یک سرعت بهینه شده از قبل، برای ارگان مورد نظر انجام دهید. افزودن CaCl2 3 میلی مولار کارایی فرایند تجزیه را افزایش می دهد.
  2. سلول های پراکنده و قطعات بافت با عبور دادن مخلوط از یک فولاد استریل زنگ نزن یا یک شبکه نایلونی، از قطعات بزرگتر جدا کنید. در صورتیکه نیاز به تجزیه بیشتر، می توان محلول کلاژناز تازه به قطعات اضافه کرد.
  3. برا ی حذف دبری ها و محلول آنزیم، چندین بار شستشو انجام دهید. یک مرحله جداسازی دانسیته (نایکودنس) باعث ایجاد یک سوسپانسیون شفاف تر خواهد شد.
  4. رسوب را در محیط کشت سوسپانسه و در شرایط تعیین شده از قبل انکوبه کنید.

نکات

ارجاعات