محیط کشت مالت اکسترکت آگار – Malt Extract

محیط کشت حاوی عصاره مالت آگار که به نام محیط کشت Malt Extract Agar نیز شناخته می شود، مناسب برای آشکار سازی، جداسازی و شمارش مخمرها و mould ها به کار می باشد. عصاره مالت، عصاره محلول در آبِ جو است و به دلیل دارا بودن مقادیر زیادی از کربوهیدرات ­ها، خصوصا مالتوز، برای رشد و تکثیر مخمرها و کپک ­ها مورد استفاده قرار می ­گیرد. مقدار قندهای احیاکننده عصاره مالت معمولا در حدود ۶۳ – ۶۰ % است. این ماده معمولا در مقادیری بین ۱۰ -۱ % در ترکیب محیط کشت به کار می ­رود و تامین کننده کربن، پروتئین و سایر مواد مغذی است. عصاره مخمر به طور خاص به اسپورزایی کپک­ هایی مانند آسپرژیلوس و پنیسیلیوم کمک می­ کند.

کاربرد عصاره مالت آگار

• محیط کشت میکروبی Malt Extract Agar برای آشکار سازی، جداسازی و شمارش مخمرها و mould ها به کار می رود.
• تشخیص آزمایشگاهی عفونت های قارچی تا حد زیادی با روش های غیر مستقیم امکان پذیر است.
• این محیط کشت همچنین برای آزمایش قارچی U.S food و دستورالعمل تحلیلی باکتریال مدیریت دارویی به کار می رود. این محیط کشت، محیطی اسیدی و مواد مغذی که برای رشد و متابولیسم مخمرها و mouldها مورد نیاز می باشد را فراهم می کند. پپتون قارچی موجب رشد قابل توجه و سریع و در عین حال با مورفولوژی معمول می شود.

کنترل کیفی عصاره مالت آگار

• ظاهر پودر: بژ روشن تا تیره، پودری و یکنواخت
• ظاهر در ترکیب محیط ۲%: کهربایی تیره و شفاف، فاقد رسوبات یا حاوی مقدار بسیار کمی رسوب
• مقدار pH محلول ۲%: ۶ – ۴/۵
• نتیجه کشت باکتری بر روی مالت آگار، پس از گرماگذاری در دمای ۳۵-۲۵ درجه سانتی­گراد تا مدت ۷ روز

سوش باکتری مناسب محیط کشت عصاره مالت

• Aspergillus niger
• Candida albicans

ترکیبات عصاره مالت آگار

• عصاره جو
• پپتون قارچی
• آگار
• Threonine
• Aspartic acid
• Serine
• Glutamic acid
• Proline
• Glycine
• Alanine
• Cysteine
• Methionine
• Isoleucine
• Leucine
• Tyrosine
• Phenylalanine
• Histidine
• Lysine
• Arginine
• Tryptophan

طرز تهیه کلی محیط های کشت عصاره مالت آگار

1. همانطوریکه می دانید محیطهای کشت به سه دسته جامد ، نیمه جامد ، مایع تقسیم می شوند . محیطهای مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است . مثلاً حدود ( ۲/۰%) و محیط های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم وبالاخره محیط های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌ کنیم.
3. در روی این شیشه ها ترکیب محیط بطور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده ودر مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته اید اضافی نموده و آنرا کاملاً‌ حل نمائید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آنرا چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و بمدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد ، آنرا برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود .
10. سپس در حالیکه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند وازتکان دادن آن خودداری نمائید.
13. پس از جامد شدن محیطهای کشت نوترینت آگار را جمع کرده ودر c37⁰ بمدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی گراد قرار می‌دهید .

نکات تکمیلی محصول عصاره مالت آگار

• نکته قابل توجه این است که باید در بخش میکروسکوپی هم علاوه بر بخش جداسازی، دقت کافی به خرج داد. محیط کشت هایی که برای جداسازی قارچ ها استفاده می شوند اسیدی هستند و طوری طراحی شده اند که از رشد باکتری ها جلوگیری می کنند.
• قوطی حاوی پودر عصاره مالت، در دمای پایین تر از ۳۰ درجه سانتی ­گراد و محیط آماده در دمای ۸ – ۲ درجه سانتی ­گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.
• PH نهایی در دمای ۲۵ درجه سانتی گراد باید حدود ۵٫۴ باشد.
•  بعضی از محیط های جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند. این محیطها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند. برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود میکنیم. جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم .