محیط کشت میکروبی (MYP Agar (Cereus Agar – ام وای پی که به نام محیط Mannitol-Egg yolk-Polymyxin-Agar / Cereus Agar نیز شناخته می‌شود، به همراه افزودنی‌های لازم برای جداسازی و تشخیص گونه‌های استافیلوکوک و باسیلوس بیماری‌زا به کار می‌رود. این محیط کشت هم چنین برای شمارش Bacillus cereus  هم به کار می‌رود. زمانی که شمار این باکتری‌ها در مواد غذایی افزایش می‌یابد، می‌تواند متابولیسم‌هایی ایجاد کند که آن متابولیسم‌ها خود باعث بروز مسمومیت‌های غذایی می‌شوند. بافت حیوانی هضم شده پپتیک و عصاره گوشت، منبع نیتروژن را برای میکروارگانیسم فراهم می‌کند. تخمیر مانیتول می‌تواند توسط فنول رد آشکار شود، به این صورت که کلنی‌هایی که قادر به تخمیر مانیتول باشند، کلنی‌های زرد تولید می‌کنند. امولسیون زرده تخم‌مرغ به‌منظور تمایز تولید لسیتیناز کمک می‌کند که توسط یک ناحیه از رسوب سفید در اطراف کلنی‌ها احاطه شده است. اضافه نمودن پلی میکسین B  سولفات از رشد باکتری‌ها گرم منفی مثل اشریشیا کلای و سودوموناس آئروجینوزا جلوگیری می‌کند. این محیط افتراقی اجازه می‌دهد که باسیلوس سرئوس از سایر گونه‌های باسیلوس جدا شود، آن هم به‌خاطر عدم توانایی این باکتری در تخمیر مانیتول و اسپورالاسیون ضعیف آن. اسیدی که به‌وسیله ارگانیسم‌های غیر از باسیلوس سرئوس تولید می‌شود، در سرتاسر محیط کشت انتشاریافته و تفکیک میکروارگانیسم‌های تخمیرکننده مانیتول را از میکروارگانیسم‌های غیرتخمیرکننده سخت می‌کند، بنابراین توصیه می‌شود که کلنی‌های مشکوک به یک محیط تازه منتقل شوند برای اینکه از واکنش صورت‌گرفته اطمینان کافی حاصل شود.

ترکیبات MYP Agar

• بافت حیوانی هضم شده پپتیک
• عصاره گوشت
• دی مانیتول
• سدیم کلرید
• فنول رد
• آگار

آماده‌سازی محیط MYP Agar

• ۲۱/۵ گرم از پودر محیط را در ۴۵۰ میلی‌لیتر آب مقطر حل کنید. به‌آرامی حرارت دهید تا محیط کاملاً حل شود.
• در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید.
• پس از خنک شدن محیط و رسیدن دمای آن به ۵۰-۴۵ درجه سانتی‌گراد، محتوای ۱ ویال از ساپلمنت باسیلوس سرئوس (iS47004) را در ۵ میلی‌لیتر آب مقطر حل کنید و با عبور از فیلتر ۰/۲۲ میکرومتری به‌صورت استریل به محیط اضافه کنید.
• مقدار ۵۰ میلی‌لیتر امولسیون زرده تخم‌مرغ (iS47020) را به‌صورت استریل به محیط اضافه کنید.
• محیط را به‌خوبی هم بزنید و در پلیت بریزید.

شرایط نگهداری محیط کشت ام وای پی آگار

• پودر محیط داخل قوطی کاملاً دربسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی‌گراد و محیط آماده در دمای ۸-۲ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.

فرآیند آزمایش محیط MYP Agar

• قبل از تلقیح، سطح پلیت محیط کشت را خشک کنید.
• نمونه غذایی را در بافر مناسب یا محیط کشت پپتون واتر (i23137) رقیق کنید.
• حدود ۰/۱ میلی‌لیتر از نمونه رقیق شده را با اسپرِدِر شیشه‌ای استریل در سطح پلیت پخش کنید.
• پلیت‌ها را در دمای ۲±۳۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۰-۱۸ ساعت گرماگذاری کنید.

نتیجه و تفسیر محیط کشت MYP Agar

• کلنی‌های باسیلوس سرئوس بر روی محیط MYP Agar به رنگ صورتی/ارغوانی، با ظاهری خشن و خشک است که حلقه‌ای از رسوب متراکم (ناشی از تأثیر آنزیم لسیتینازِ باکتری بر روی لسیتین زرده تخم‌مرغ) آن را احاطه کرده است. برای شمارش پلیت کانتِ باکتری از کلنی‌هایی با همین ویژگی‌ها استفاده می‌شود. کلنی‌هایی که با هاله‌ای بی‌رنگ یا به زردرنگ احاطه شده‌اند، باسیلوس سرئوس نیستند.
• کلنی‌های رشد کرده بر روی محیط MYP Agar که به‌عنوان باسیلوس سرئوس در نظر گرفته می‌شوند باید توسط تست‌های تأییدی بعدی مورد بررسی قرار گیرند.

کنترل کیفی محیط کشت ام وای پی آگار

• ظاهر محیط دهیدراته: صورتی رنگ، یکنواخت و پودری
• ظاهر محیط آماده: قرمزرنگ، کمی مات، بدون رسوب
• نتیجه کشت باکتری، پس از افزودن امولسیون زرده تخم‌مرغ و ساپلمنت باسیلوس سرئوس، با گرماگذاری در دمای ۲±۳۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۰-۱۸ ساعت