محیط کشت بروموکروزول پرپل آزید براث – Bromocresol Purple Azide

محیط کشت Bromocresol Purple Azide Broth که به نام محیط کشت بروموکروزول پرپل آزید براث و بروموکروزول بنفش آزید براث نیز شناخته می‌شود، مناسب برای تأیید حضور استرپتوکوک‌ها در مدفوع، آب و فاضلاب توصیه می‌شود. انتروکوک‌ها توزیع گسترده‌ای دارند و در زیستگاه‌های مختلفی وجود دارند. بروموکروزول بنفش آزید براث، دارای دکستروز (D-glucose) به‌عنوان منبع کربن قابل جذب است و بروموکرزول بنفش به‌عنوان یک شناساگر در محیط می‌باشد تغییر رنگ محیطی از بنفش تا زرد، نشانگر تخمیر دکستروز (D-glucose) و تولید اسید پس از تخمیرشدن دکستروز است. باتوجه‌به Hajna، تخمیر انتروکوک دکستروز با افزودن گلیسرول بهبود می‌یابد. تریپتون و عصاره مخمر، ترکیبات نیتروژن‌دار، گوگرد و زنجیره طولانی آمینواسید و مواد غذایی را برای محیط فراهم می‌کند. سدیم کلرید تعادل اسمزی محیط را حفظ می‌کند. آزید سدیم مانع حضور باکتری‌های فلور نرمال روده ایی می‌شود. تغییر رنگ محیط به زرد با کدورت نشان‌دهنده رشد انتروکوک‌ها است.

فرمولاسیون محیط کشت بروموکروزول بنفش آزید براث

• Tryptone  ۰۰۰
• Yeast extract  ۰۰۰
• D-Glucose  ۰۰۰
• Sodium chloride  ۰۰۰
• Dipotassium hydrogen phosphate  ۷۰۰
• Potassium dihydrogen phosphate  ۷۰۰
• Sodium azide  ۵۰۰
• Bromocresol purple 0.032
• Final pH ( at 25°C) 7.0±۰٫۲

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.