مهارکننده ریبونوکلئاز یک پروتئین اسیدی، محلول و موجود در سیتوپلاسم است که به مقدار زیادی در جفت انسان وجود دارد. این ماده به روش شیمیایی کروماتوگرافی تعویض یون و با کمک میل ترکیبی از جفت انسان در مقیاس مشخص، استخراج و خالص میگردید.وزن مولکولی این پروتئین در حدود 48000 دالتون است که از طریق الکتروفورز با ژل اکریلآمید و سدیم دود سیل سولفات به همراه سایر پروتئینهای استاندارد سنجش و مشخص گردیده است.
اجزای تشکیلدهنده
100mM Tris-HCL (PH 7.5), 1.2mM EDTA, 0.1mg/ml BSA, 100ng/ml RNase , 0.1mg/ml E.coli] 3H[-RNA,50mg/ml yeast RNA and 8mM DTT.
کاربرد مهارکننده ریبونوکلئاز:
از این مهارکننده میتوان در روشهایی که آلودگی RNase مشکل ایجادمی کند، استفاده کرد.این آلودگی ممکن است در موارد زیر ایجاد شود:
- رونویسی ژنوم در محیط آزمایشگاه
- بیان ژنوم در محیط آزمایشگاه
- ساخت و سنتز cDNA
- فرایند جداسازی و تلخیص اجزای سلولی پستانداران (حاوی کمپلکس mRNA- پروتئین)
- جداسازی و شناسایی فعالیتهای ریبونوکلئاز خاص.
کنترل کیفیت
از نظر عملکردی در سنتز RNA و CDNA عدم وجود اندودوکسی ریبونوکلئازها، اگزودوکسی ریبونوکلئازها، فسفاتاز و ریبونوکلئازها توسط تستهای باکیفیت مناسب تأیید شده است.
نکات مهم در زمان استفاده از محصول:
- یک واحد از این آنزیم بهعنوان مقدار مهارکننده ریبونوکلئاز RNaseOFF تعریف میشود که برای جلوگیری از فعالیت ۵ نانوگرم RNase A به میزان ۵۰٪ موردنیاز است.
- هنگام انجام واکنش، RNaseOFF را همیشه روی یخ نگه دارید.
- توصیه میشود همه کارهای مربوط به RNA یا مراحل کاری حساس به RNase را در شرایطی که آلودگی RNase از بین رفته است، تنظیم کنید.
- سرسمپلر و لولههای آزمایش باید با ۰٫۱٪ DEPC نگهداری شوند.
- استفاده از دستکش هنگام کار با RNA بسیار توصیه میشود.
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.