پس از انکوباسیون و شستشو، محلول آنزیم کونژوگه که حاوی استرپتاویدین لیبل شده با آنزیم HRP می‌باشد به چاهک‌ها اضافه می‌شود. این استرپتاویدین به بیوتین کمپلکس‌های فوق متصل می‌شود. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول سوبسترا و کروموژن به چاهک‌ها اضافه می‌شود. رنگ آبی ایجاد شده بعدازاین مرحله نتیجه تجزیه سوبسترا در اثر فعالیت آنزیم و تغییر رنگ محلول کروموژن ناشی از این واکنش می‌باشد. شدت این رنگ متناسب با تعداد کمپلکس‌های ایمنی ایجاد شده در چاهک‌ها می‌باشد. با افزودن محلول متوقف‌کننده رنگ آبی به زرد تبدیل می‌شود که بهترین جذب نوری را در طول موج ۴۵۰ نانومتر دارد.

محتویات کیت الایزا HIV پیشتازطب سنجش آنتی‌بادی علیھ آنتی‌ژنھای HIV به روش الایزا

1.  پلیت ۹۶ خانه حاوی چاهک‌های پوشش داده شده با آنتی‌ژن‌های اختصاصی HIV-1 و HIV-2 و آنتی بادی اختصاصی P24 HIV-1
2.  محلول کونژوگه یک(Conj-1) : یک ویال حاوی۷۵/۰ میلی‌لیتر کونژوگه غلیظ (x20).این محلول را باید با محلول رقیق‌کننده کونژوگه قبل از مصرف به نسبت ۲۰/۱رقیق نمود
3. محلول رقیق‌کننده کونژوگه یک (Conj-1 Diluent) یک ویال حاوی ml 15 محلول جهت رقیق‌سازی کونژوگه غلیظ
4.  محلول کونژوگه دو (Conj-2) یک ویال حاوی  ml 12 محلول آماده مصرف استرپتاویدین لیبل شده با آنزیم HRP
5.  سرم کنترل مثبت آنتی‌بادی (AntibodyPositive Control):حاوی ml1 سرم انسانی غیرفعال شده حاوی آنتی‌بادی علیه HIV-1 و HIV-2
6.  سرم کنترل مثبت آنتی‌ژن (AntigenPositive Control):حاوی ml1 سرم انسانی منفی از نظر آنتی‌بادی‌های HIV-1 و HIV-2 حاوی آنتی ژن P24 نوترکیب.
7. سرم کنترل منفی(Negative Control): حاوی ml1 سرم انسانی منفی از نظر آنتی‌ژن P24 و آنتی‌بادی‌های HIV-1 و HIV-2
8.  محلول رنگ‌زای یک‌مرحله‌ای (Chromogen-Substrate) :1 ویال حاوی ۱۲ میلی‌لیتر محلول رنگ‌زا آماده برای مصرف
9.  محلول شستشو(Wash Solution):دو ویال حاوی ۵۰ میلی‌لیتر محلول شستشوی غلیظ (X10). جهت تهیه محلول شستشوی آماده مصرف، مقدار موردنیاز را با آب مقطر به نسبت ۱۰/۱رقیق نمایید.
10.  محلول متوقف‌کننده Stop Solution: یک ویال حاوی ۱۲ میلی‌لیتر اسیدکلریدریک ۱ نرمال .
11.  برچسب مخصوص پلیت.

نکات قابل‌ذکر برای مصرف‌کنندگان :

• محتویات این کیت تنها برای مصرف در همین کیت قابل‌استفاده هستند.
• این کیت صرفاً جهت اندازه‌گیری Antigen P24 و Anti-HIV در سرم و پلاسمای انسانی طراحی و ساخته شده است.
• از مخلوط کردن محتویات کیت‌ها با شماره ساخت‌های مختلف جداً خودداری نمایید.
• کلیه مواد موجود در کیت که منشأ سرمی دارند از نظر وجود آنتی‌ژن‌های HBs ،HCV و HIV و آنتی‌بادی‌های HIV و HCV کنترل گردیده و فاقد این عوامل هستند. کنترل مثبت آنتی‌بادی کیت حاوی آنتی‌بادی‌های HIV و از نظر آنتی‌ژن HIV غیرفعال شده است. کنترل مثبت آنتی‌ژن کیت حاوی آنتی‌ژن P24 نوترکیب می‌باشد. غیرفعال‌سازی سرم یا پلاسما به مدت نیم ساعت در ۵۶ درجه سانتی‌گراد انجام‌گرفته است؛ جهت احتیاط بهتر است کاربرانی که با کیت کار می‌کنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند .
• هنگام انجام آزمایش حتماً از دستکش‌های یکبار مصرف استفاده کنید. همچنین استفاده از عینک‌های آزمایشگاهی هنگام کار با سرم‌های بیماران توصیه می‌شود.
• سرم‌های مثبت از نظر آنتی‌بادی‌های ضد HIV،وسایل و محلول‌های wash مشکوک به آلودگی را بعد از اتمام کار به مدت حداقل ۳۰ دقیقه در مجاورت محلول هیپوکلریت سدیم ۵% یا محلول‌های مناسب ضدعفونی‌کننده دیگر قرار دهید. همچنین اتوکلاو، به مدت ۲۰ دقیقه در ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد نیز پیشنهاد می‌گردد.

شرایط نگهداری کیت پیشتازطب

• سنجش آنتی‌بادی علیھ آنتی‌ژن ھای HIV به روش الایزا
• کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری نمایید .
• چاهک‌ها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید.
• پایداری پلیت بعد از باز کردن آن ۴ ماه می‌باشد.
• پایداری محتویات کیت قبل از باز شدن درب کیت تا پایان مدت انقضای یاد شده بر روی هر یک از آنها می‌باشد.
• توصیه می‌شود بعد از باز کردن کیت حداکثر در فاصله زمانی ۴ ماه از آن استفاده نمایید.
• محلول شستشو را به نسبت ۱۰/۱با آب مقطر رقیق نمایید این محلول آماده مصرف به مدت یک هفته در شرایط ۸-۲ درجه سانتیگراد قابل نگهداری و مصرف می‌باشد.