کیت الایزا TSH نوزادان – Neo TSH

کیت الایزا TSH نوزادان که به نام کیت الایزا Neonatal TSH نیز شناخته می‌شود مناسب برای اندازه‌گیری غلظت TSH در لکه خون خشک شده به روش ایمونو آنزیماتیک (الایزا) می‌باشد. کم‌کاری غده تیروئید در دوران جنینی می‌تواند اختلالات غیرقابل‌بازگشت ساختاری و عملکردی در سیستم عصبی مرکزی و اسکلتی ایجاد کند اما انتقال تیروکسین مادری از طریق بندناف به جنین از بروز علائم بالینی بارز در بدو تولد جلوگیری می‌کند. باتوجه‌به خفیف بودن علائم این بیماری در روزهای اول زندگی، معمولاً تشخیص این نارسائی با تأخیر صورت می‌گیرد و منجر به ازدست‌دادن ضریب هوشی در درجات مختلف می‌شود، بنابراین انجام تست غربالگری TSH نوزادان به روش الایزا از اهمیت بالایی برخوردار است.

ساختار و نقش فیزیولوژیک TSH

تیروتروپین یا هورمون محرک تیروئید (Thyroid simulating hormone)، گلیکوپروتئینی با وزن مولکولی ۲۸ کیلو دالتون از دو زنجیره آلفا و بتا ساخته شده است که با پیوندهای غیرکوالانسی به هم متصل شده‌اند. خصوصیات هورمونی و ایمونولوژیکی ویژه TSH توسط زیر واحد اختصاصی بتا ایجاد می‌شود. از لحاظ ساختار مولکولی زیر واحد آلفای TSH با زنجیره هورمون‌های گیلیکوپروتئینی، (LH ،hCG ،FSH) شباهت دارد.

تولید و ترشح TSH از سلول‌های بازوفیل بخش پیشین غده هیپوفیز با مکانیسم فیدبک منفی تحت کنترل هورمون‌های تیروئیدی T4 و T3 آزاد در خون است. به‌طوری که افزایش سطح سرمی آنها باعث کاهش ترشح هورمون آزادکننده تیروتروپین (Thyrotropin releasing hormone) مترشحه از هیپوتالاموس شده و به‌تبع آن میزان TSH سرمی کاهش می‌یابد و بالعکس. علاوه بر TRH دو هورمون سوماتواستاتین و دوپامین نیز که از هیپوتالاموس ترشح می‌شوند بر ترشح TSH اثرگذار هستند لیکن این دو تأثیر بازدارنده دارند.

وظیفه اصلی TSH تحریک رشد سلول‌های فولیکولی تیروئیدی و کنترل ترشح هورمون‌های T4 و T3 می‌باشد که از این طریق به‌صورت غیرمستقیم نقش اساسی در متابولیسم، تمایز و رشد سلولی بدن و فعالیت سیستم عصبی دارد.

کاربرد بالینی کیت الایزا Neonatal TSH

جهت جلوگیری از عوارض غیرقابل‌بازگشت نارسایی ژنتیکی TSH، غربالگری هیپوتیروئیدی نوزادان، اولین‌بار در دهه هفتاد میلادی در ایالت کبک کانادا انجام گردید و با درمان سریع مبتلایان شناسایی شده از بروز عوارض مربوطه جلوگیری شد. امروزه این غربالگری با استفاده از خون تام جذب شده بر روی کاغذ 903 Whatman در تمامی کشورهای پیشرفته از جمله ایران انجام می‌گردد.

باتوجه‌به آغاز برنامه غربالگری هیپوتیروئیدی نوزادان در کشور از سال 1384 و آمار به‌دست‌آمده از آن مشخص گردید که شیوع این بیماری مادرزادی در مناطق مختلف ایران بیش از میانگین آمار جهانی بوده و بین 1:250 تا 1:900 تولد می‌باشد. باتوجه‌به شیوع بالا و قابل پیشگیری بودن عوارض بیماری در صورت درمان به‌موقع و صحیح لزوم غربالگری هیپوتیروئیدی نوزادان در کشور مشخص می‌باشد.

اصول اندازه‌گیری کیت الایزا Neonatal TSH

کیت اندازه‌گیری کمی TSH نوزادان بر مبنای سنجش واکنش ایمونوآنزیماتیک بر روی فاز جامد طراحی شده است. در این سیستم از دو آنتی‌بادی مونوکلونال که شاخص‌های آنتی‌ژنیک متمایزی را بر روی مولکول TSH شناسائی می‌کنند، استفاده می‌شود. ابتدا دایره‌هایی به قطر ۳ میلی‌متر که حاوی خون تام نوزادان، استانداردها و با کنترل‌ها آن را از لکه‌های خشک شده بر روی کاغذ صافی 903 شرکت Shleicher & Schuell جدا می‌کنند. سپس دایره‌ها درون حفره‌های پلی‌استایرن پوشیده شده با آنتی بادهای مونوکلونال TSH قرار می‌گیرد.

در انکوباسیون اول، TSH موجود در نمونه‌ها به آنتی‌بادی‌های ضد TSH متصل و بقیه مواد پس از تخلیه و شستشو از سیستم خارج می‌شوند. پس از شستشو، آنتی‌بادی دوم ضد TSH که به آنزیم پراکسیداز (HRP) متصل شده است به حفره‌ها افزوده می‌شود. بعد از دومین انکوباسیون و شستشو، با افزودن سوبسترا TMB آنزیم رنگ آبی ایجاد می‌کند. شدت رنگ ایجاد شده با غلظت TSH موجود در نمونه‌ها نسبت مستقیم دارد. رنگزائی واکنش آنزیماتیک پس از افزودن محلول متوقف‌کننده خاتمه می‌یابد و رنگ آبی ایجاد شده به رنگ زرد تبدیل می‌شود و باتوجه‌به طول موج ارائه شده در کاتالوگ کیت الایزا Neonatal TSH زیر می‌توان نتیجه تست را به دست آورد.