کیت رنگ آمیزی گرم سیب زیست

دامنه کاربرد کیت رنگ‌آمیزی گرم :

رنگ‌آمیزی گرم یکی از مهم‌ترین تکنیک‌های رنگ‌آمیزی در میکروب‌شناسی است و می‌توان گفت اولین آزمونی است که برای شناسایی تقریباً همه باکتری‌ها باید انجام شود.

اطلاعات کلی مصرف کیت رنگ‌آمیزی گرم:

در این روش ابتدا رنگ بازی کریستال ویوله توسط باکتری‌های کشته و تثبیت شده بر روی اسلاید، جذب می‌شود. سپس با افزودن آیوداین (محلول ید) رسوبی از کمپلکس کریستال ویوله – ید در پروتوپلاسم و دیواره سلول تشکیل می‌شود. در مرحله بعد باکتری‌ها در مجاورت حلال رنگ‌بر قرار می‌گیرند. در باکتری‌های گرم مثبت ساختار بیوشیمیایی اصلی دیواره (پپتیدوگلیکان) الی‌های ضخیم است و پس متراکم شدن در اثر آبگیری با رنگ‌بر، نفوذناپذیرشده و مانع از خروج کریستال ویوله – ید از سلول می‌شود. در دیواره سلول‌های گرم منفی، پپتیدوگلیکان الیه ظریفی از دیواره را تشکیل می‌دهد و بقیه دیواره که از جنس چربی است در رنگ‌بر حل شده و از بین می‌رود. در نتیجه کمپلکس رنگی به‌راحتی از پروتوپلاسم شسته شده و از سلول خارج می‌شود. در این مرحله باکتری‌های گرم منفی بی‌رنگ شده و باکتری‌های گرم مثبت همچنان بنفش باقی می‌مانند. در مرحله پایانی از سافرانین به‌عنوان رنگ مخالف استفاده می‌شود. باکتری‌های گرم منفی رنگ صورتی تا ارغوانی می‌گیرند. باکتری‌های گرم مثبت همچنان رنگ غالب اول یعنی بنفش تا آبی تیره دیده می‌شود.

شیوه آماده‌کردن اسلاید

تهیه گستره: یک قطره آب مقطر در مرکز یک لام تمیز بگذارید. به کمک فیلدوپالتین (لوپ یا سوزن) استریل شده با شعله، از کلنی یا نمونه حاوی باکتری در قطره آب سوسپانسیون تهیه کنید و آن را به قطر cm 5/1 در وسط اسلاید بگسترانید. کمی صبر کنید تا خشک شود.

تثبیت: با سه بار گذراندن لام از بالای شعله (هر بار ۲-۱ ثانیه با رساندن گرمای ملایم به پشت لام) گستره را تثبیت کنید.

دستورالعمل رنگ‌آمیزی گرم

۱ روی گستره تثبیت شده ۲-۱ قطره محلول کریستال ویوله بریزید و پس از یک دقیقه اسلاید را به‌آرامی با آب بشویید.

۲ سپس ۲-۱ قطره محلول ید را روی گستره بریزید و یک دقیقه بعد اسلاید را با آب بشویید.

۳ چند قطره از محلول رنگ‌بر روی گستره بچکانید تا زمانی که قطرات سرازیر شده ازروی گستره رنگی نباشد. سپس اسلاید را با آب بشویید.

۴ گستره روی اسلاید را با ۲-۱ قطره محلول سافرانین به مدت ۳۰ ثانیه رنگ‌آمیزی کرده و سپس با آب بشویید.

۵ اسلاید را مایل رها کنید تا خشک شود. می‌توانید از روغن ایمرسیون و ابژکتیو ۱۰۰X استفاده کنید.

نتیجه:

باکتری‌های گرم مثبت: بنفش تا آبی تیره

باکتری‌های گرم منفی: صورتی تا ارغوانی

نگهداری کیت رنگ‌آمیزی گرم:

بهترین دمای نگهداری کیت ۲۰ تا ۳۰ درجه سانتیگراد است.
از قراردادن محلول‌ها در مجاورت نور مستقیم و حرارت خودداری کنید.

احتیاط و ایمنی:

محلول‌ها حاوی مواد سمی است.
از قراردادن محلول رنگ‌بر در مجاورت شعله بپرهیزید.
همه محلول‌ها به چشم و پوست آسیب می‌رساند. در هنگام کار از روپوش
مناسب و دستکش و عینک استفاده کنید. در صورت تماس، پوست و چشم را
با آب فراوان بشوید.
پس از استفاده درب بطری‌ها به‌خوبی ببندید.