محتویات کیت microRNAU6 انسانی:
- محتویات مستر میکس سنتز CDNA:
پرایمر looped مخصوص U6، پروب ، 50 میلی مولار Mgcl2 ، Reverse transcriptase، 10 میلی مولار dNTP ، بافر و آب
- مستر میکس Real time :
پرایمر، پروب ، 50 میلی مولار mgcl2 ، Taq پلی مراز ، 10 میلی مولار dNTP ، بافر میکس و آب
- استاندارد 1 (10000 کپی / ML) ، استاندارد2 ( 1000 کپی / ML ) ، استاندارد 3 (100کپی / ML ) و کنترل منفی
مخلوط آماده سازی :
- 10 میکرولیتر مستر میکس را به هر میکروتیوب اضافه کنید.
- 5 میکرولیترDNA ویروسی ، کنترل مثبت و کنترل منفی به هر میکروتیوب بیافزایید، به مدت 10 ثانیه مخلوط و اسپین نمایید.
برنامه PCR :
سنتز CDNA : پنجاه درجه به مدت 30 دقیقه
دناتوراسیون آغازی : 95 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه : در این مرحله Taq پلی مراز فعال شده و DNA ویروسی دناتوره می شود.
40 سیکل : 95 درجه سانتی گراد به مدت15 ثانیه ، 55 درجه سانتی گراد به مدت10 ثانیه ، 72 درجه سانتی گراد به مدت 25 ثانیه
آشکار سازی فلورسنت : در green (FAM) channel و در 55 درجه سانتی گراد
آنالیز Real time :
در صورتی که بعد از 40 سیکل نمونه مثبت بود ، تست باید دوباره انجام شود.
نمونه: پلاسما ، خون کامل ، بافت
نکاتی درباره microRNAU6 انسانی :
میکرو RNA ، RNA های کوچک ( 20 تا 24 نوکلئوتیدی ) non-coding هستند که در تنظیمات پس از رونویسی ژن در موجودات پر سلولی با تاثیر بر روی پایداری و ترجمه mRNA نقش ایفا می کنند. MiRNAs توسط RNA پلی مراز II به عنوان بخشی از cap و polyadenilation رونویسی می شود . miRNA اولیه (pri-miRNAs) هم می تواند کد کننده پروتئین باشد و هم نباشد.
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.