توضیحات

کیت Real-time PCR Assay برای تشخیص ویروس پاپیلومای انسانی

HUMAN PAPILLOMA VIRUS – ASSAY

ترکیبات کیت:

• مستر میکس Real time :

پرایمر، پروب ، ۵۰ میلی مولار Mgcl2 ، Taq پلی مراز، ۱۰ میلی مولار dNTP ، بافر با آب

• کنترل مثبت ( ۵۰۰,۰۰۰ کپی/میلی لیتر)- کنترل منفی

مخلوط آماده سازی :

• ۱۰ میکرولیتر مستر میکس Real time را به هر میکروتیوب اضافه کنید.
• ۵ میکرولیتر DNA ویروسی ، کنترل مثبت و کنترل منفی به هر میکروتیوب بیافزایید، به مدت ۱۰ ثانیه مخلوط و اسپین نمایید، برای ارزیابی کپی نامبر ویروس در نمونه خود ، ۲ تا serial dilutions ساخته و آن را برای فرآیند Real- time PCR خود تعریف کنید.

برنامه Real-time PCR :

• دناتوراسیون آغازی : ۹۵ درجه سانتی گراد به مدت ۵ دقیقه: در این مرحله Taq پلی مراز فعال شده و DNA ویروسی دناتوره می شود.
• ۴۰ سیکل : ۹۵ درجه سانتی گراد به مدت ۱۵ ثانیه ، ۵۸ درجه سانتی گراد به مدت ۱۰ ثانیه، ۷۲ درجه سانتی گراد به مدت ۱۵ ثانیه
• آشکار سازی فلورسنت: در green (FAM) channel و در ۷۲ درجه سانتی گراد.

آنالیز Real-time  :

اگر بعد ۳۸  سیکل نمونه مثبت بود، آزمایش باید دوباره انجام شود و با الکتروفورز ۱٫۵ تا ۲ % آگارز چک شود.

باندهایی که از ۱۲۰ جفت باز بزرگتر باشند، HPV مثبت می باشند.