محیط کشت استامید نوترینت براث

محیط کشت استامید نوترینت براث – Acetamide Nutrient Broth مناسب سنجش مصرف میکروب از استامید میباشد که وجود ارگانیسم قادر به تخریب استامید با فعالیت آکریلامیداز را نشان میدهد. توانایی د امینات استامید بیشتر درمورد سودوموناس ائروژینوزا و الکالی ژنز فکالیس می باشد. محیط کشت Acetamide Nutrient Broth حاوی نمک های معدنی مختلف و استامید به عنوان منابع کربن و نیتروژن می باشد . ارگانیسم هایی که در این محیط رشد می کنند توسط استامید متابولیزه می شوند و در نتیجه آمونیاک آزاد می کنند. این آمونیاک آزاد شده را می توان توسط معرف Nesslers شناسایی کرد که درمورد سودوموناس ائروژینوزا را تأیید می کند. منیزیم سولفات ، آهن سولفات و سدیم molybdate منبع یون هایی هستند که متابولیسم را تحریک می کنند. کلرید سدیم تعادل اسمزی محیط را حفظ می کند. دی پتاسیم هیدروژن فسفات ، بافر محیط فراهم می کند. همچنین برای افتراق باکتری­های گرم منفی غیرتخمیری، خصوصا Pseudomonas aeruginosa.

• فرمولاسیون محیط :
• Part A –  –
• Magnesium sulphate 158
• Sodium chloride 200
• Sodium molybdate 005
• Ferrous sulphate   ۰۰۰۵
• Dipotassium hydrogen phosphate 200
• Part B –     –
• Acetamide 000
• Final pH ( at 25°C) 7.0±۰٫۲

طرز تهیه کلی محیط های کشت :

همانطوریکه می دانید محیطهای کشت به سه دسته جامد ، نیمه جامد ، مایع تقسیم می شوند . محیطهای مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است . مثلاً حدود ( ۲/۰%) و محیط های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم وبالاخره محیط های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .

برای ساختن محیط های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌ کنیم. در روی این شیشه ها ترکیب محیط بطور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است . مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده ودر مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته اید اضافی نموده و آنرا کاملاً‌ حل نمائید وسپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید ، تا زمان جوشیدن آنرا چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و بمدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد ، آنرا برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید وظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود . بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40 . سپس در حالیکه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید ، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید وبعد درون پلیت های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید . بعد پلیت ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند وازتکان دادن آن خودداری نمائید وپس از جامد شدن محیطهای کشت نوترینت آگار را جمع کرده ودر c37⁰ بمدت ۲۴ ساعت قرار دهید . اگر محیط ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی گراد قرار می‌دهید .

طرز ساختن سایر محیطهای کشت، همینطور می‌باشد منتهی بعضی از محیطهای جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیطها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند .

برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم .