محیط کشت آکتینومایسس آگار – Actinomyces

محیط کشت Actinomyces Agar که به نام محیط کشت اکتینومایسس نیز شناخته می‌شود، مناسب برای کشت و نگهداری، گونه‌های بی‌هوازی اکتینومایسس (Activinomyces) استفاده می‌شود. اکتینومایسس ها باکتری‌های گرم مثبتی هستند که دارای تنوع شیمیایی و مورفولوژیکی زیادی هستند؛ اما از لحاظ تکاملی ارگانیسم‌هایی با اشکال کوکویید ی و پلومورفیکی تا رشته‌های شاخه‌ای را تشکیل می‌دهند. اکتینومیست‌ها بخش جدایی‌ناپذیری از خاک، آب و پوشش گیاهی هستند. این باکتری‌ها همچنین باعث اختلال در تصفیه فاضلاب می‌شوند که با ایجاد رشد وسیعی که قادر است به تولید فوم ضخیم در فرآیند لجن فعال منجر گردد. تزریق گوشت قلب، تریپتوز، آنزیم هیدرولیزات کازئین، عصاره مخمر، نشاسته و دکستروز که به‌عنوان منابع کربن، نیتروژن، گوگرد، ویتامین‌ها و سایر فاکتورهای رشد می‌باشند. نمک‌های فلزی، الکترولیت‌ها و مواد معدنی ضروری محیط را فراهم می‌کنند.

فرمولاسیون محیط Actinomyces Agar

Gms / Litre

• Beef heart infusion, solids            ۱۰٫۰۰۰
• Tryptose            ۱۰٫۰۰۰
• Casein enzymic hydrolysate              ۴٫۰۰۰
• Yeast extract              ۵٫۰۰۰
• Dextrose              ۵٫۰۰۰
• L-Cysteine hydrochloride              ۱٫۰۰۰
• Starch, soluble              ۱٫۰۰۰
• Sodium chloride              ۵٫۰۰۰
• Monopotassium phosphate            ۱۵٫۰۰۰
• Ammonium sulphate              ۱٫۰۰۰
• Magnesium sulphate              ۰٫۲۰۰

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.