محیط کشت اکتینومایسس ایزولیشن آگار – Actinomycete Isolation

محیط Actinomycete Isolation Agar که به نام محیط کشت اکتینومایسس آگار نیز شناخته می‌شود، مناسب برای جداسازی و تکثیر اکتینومیست‌ها از خاک و آب استفاده می‌شود. اکتینومیست‌ها باکتری‌های گرم مثبتی هستند که تنوع شیمیایی و مورفولوژیکی زیادی دارند؛ اما از لحاظ تکاملی ارگانیسم‌هایی با اشکال کوکویید ی و پلومورفیک تا رشته‌های شاخه‌ای را تشکیل می‌دهند. اکتینومیست‌ها بخش جدایی‌ناپذیری از خاک، آب و پوشش گیاهی هستند. این باکتری‌ها همچنین باعث اختلال در تصفیه فاضلاب می‌شوند، با رشد وسیعی که قادر است به تولید فوم ضخیم در فرآیند لجن فعال منجر شود. رشد اکتینومیست‌ها منجر به تشکیل متابولیت‌های فرار می‌شود. محیط Actinomycete Isolation Agar حاوی سدیم کازئین به‌عنوان منبع نیتروژن است و آسپارژین علاوه بر آمینواسید بودن یک منبع نیتروژن نیز می‌باشد. محیط را در دمای ۳۵-۳۷ درجه سانتیگراد برای ۴۰-۷۲ ساعت، انکوبه می‌کنیم و پس از رشد کافی، می‌شود محیط‌ها را برای درازمدت ذخیره‌سازی کرد. با افزودن گلیسرول به آن (عنوان منبع کربن)، برای جداسازی و تکثیر باکتری‌های Actinomycete ­از آب‌وخاک استفاده می‌شود.

فرمولاسیون محیط Actinomycete Isolation Agar

• Sodium caseinate  ۰۰۰
• L-Asparagine  ۱۰۰
• Sodium propionate  ۰۰۰
• Dipotassium phosphate 500
• Magnesium sulphate  ۱۰۰
• Ferrous sulphate 001
• Agar 000
• Final pH ( at 25°C) 8.1±۰٫۲

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.