محیط کشت آزید بلاد آگار – Azide Blood

محیط کشت Azide Blood Agar Base که به نام محیط کشت آزید بلاد آگار پایه نیز شناخته می شود، مناسب برای جداسازی و کشت نمونه‌های استافیلوکوک و استرپتوکوک از باکتری فلور نرمال استفاده می‌شود. سدیم آزید بر روی اکثر ارگانیسم گرم منفی، دارای اثر باکتریواستاتیک است، اما اجازه رشد به ارگانیسم‌های گرم مثبت مانند استرپتوکوک‌ها و بعضی از سوسیس استافیلوکوک‌ها را می‌دهد. کلرید سدیم برای حفظ تعادل اسمزی در محیط است. برای تهیه بلاد آگار، می‌توان از محیط‌های حاوی خون دفیبرینه استریل استفاده کرد. خون به‌عنوان یک منبع اضافی از فاکتورهای رشد به کار می‌رود و همچنین به مشاهده الگوی همولیتیک نیز کمک می‌کند. pH محیط تحت‌تأثیر بازدارندگی آیزاد سدیم قرار دارد.

فرمولاسیون محیط Azide Blood Agar Base

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.