محیط کشت میکروبی Bile Esculin Agar که به نام محیط بایل اسکولین آگار پایه نیز شناخته می‌شود که مناسب جهت تمایز انتروکوک‌ها و باکتری‌های گروه استرپتوکوکوس بوویس از سایر استرپتوکوک‌ها می‌باشد. محیط بایل اسکولین آگار یک محیط افتراقی برای جداسازی و شناسایی احتمالی استرپتوکوک گروه D از مواد غذایی و محصولات دارویی می‌باشد. انتروکوک و گروه استرپتوکوک‌های D با هیدرولیز اسکولین به اسکولتین و دکستروز که با فریک سیترات موجود در محیط، ایجاد رسوب قهوه‌ای سیاه می‌کند. بایل اسکولین آگار همچنین برای تشخیص انتروباکتریاسه، کلبسیلا، انتروباکتر، سراشیا از سایر گونه‌های انتروباکتریاسه بر اساس هیدرولیز اسکولین کمک می‌کند. بااین‌وجود، آزمایش‌های دیگری مانند تحمل نمک برای شناسایی انتروکوک‌ها انجام می‌شود.

آماده‌سازی محیط بایل اسکولین آگار

• ۴۳/۵ گرم از پودر محیط را در یک لیتر آب مقطر حل کرده و کاملاً مخلوط کنید.
• به‌آرامی حرارت داده و به مدت یک دقیقه بجوشانید تا محیط به طور کامل حل شود.
• محیط کشت را در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید.

کنترل کیفی بایل اسکولین آگار

• ظاهر پودر: رنگ بژ یکدست و وجود مقادیر بسیار کم از دانه‌های تیره‌رنگ
• ظاهر محیط آماده: محلول کهربایی تیره مایل به زیتونی با هاله آبی‌رنگ، کمی کدر
• نتیجه کشت باکتری در شرایط هوازی پس از گرماگذاری در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۸-۴۲ ساعت

ترکیبات بایل اسکولین آگار

• ژلاتین (Pancreatic Digest of Gelatin)
• عصاره گوشت (Beef extract)
• اگزال (Oxgall)
• فریک سیتراته (Ferric citrate)
• اسکولین (Esculin)
• آگار (Agar)

نتیجه و تفسیر بایل اسکولین آگار

• چنانچه کشت در پلیت انجام شده باشد، هرگونه سیاه شدن رنگ محیط کشت در پلیت نشان‌دهنده واکنش مثبت و عدم سیاه شدن آن نشان‌دهنده واکنش منفی خواهد بود.
• در مواردی که نمونه در محیط کشت آماده شده به‌صورت اسلنت (مایل در لوله) کشت داده شده باشد، اگر پس از ۴۸-۲۴ ساعت از نیمی از اسلنت سیاه شده باشد، نتیجه آزمایش مثبت و چنانچه پس از این مدت کمتر از نیمی از آن سیاه شده یا اصلاً سیاه نشده باشد، نتیجه آزمایش منفی گزارش خواهد شد.

نکات تکمیلی بایل اسکولین آگار

• پودر محیط داخل قوطی کاملاً دربسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی‌گراد و محیط آماده در دمای ۸-۲ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.
• نمونه‌ها را در پلیت کشت دهید و به مدت ۴۸-۲۴ ساعت در شرایط هوازی در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی‌گراد گرماگذاری کنید.
• سویه‌هایی از باکتری‌های لاکتوکوکوس، لوکونوستوک و پدیوکوکوس از عفونت‌های انسانی جدا شده‌اند که واکنش مثبتی در این محیط کشت داشته‌اند.
• ندرتاً سویه‌هایی از استرپتوکوک‌های ویریدانس قادر به سیاه کردن محیط کشت بایل اسکولین آگار و ایجاد واکنش مثبت ضعیفی می‌باشند.