محیط کشت BGBB – برلیانت گرین بابل براث ۲٪

محیط کشت برلیانت گرین بایل (لاکتوز) براث ۲٪ (Brilliant Green Bile Broth 2%) که به نام محیط BGBB نیز شناخته می‌شود. مناسب شناسایی، غنی‌سازی انتخابی، شمارش E.coli و سایر کلیفرم ­ها در آب، پساب، شیر، لبنیات و مواد غذایی با استفاده از روش MPN می‌باشد.

ویژگی محیط کشت BGBB

• محیط  برلیانت گرین بایل براث برای جداسازی، افتراق و شمارش باکتری‌های کولیفرم مورد استفاده قرار می‌گیرد.
• این ماده به ویژه در جدا سازی انتخابی سالمونلا مفید است.
• این محیط کشت برای بازیابی ارگانیسم‌های گروه کولی آئروژنیس فرموله شده است.
• اجزای صفراوی و سبزدرخشان، ارگانیسم‌های گرم مثبت را مهار می‌کنند.
• در حالی که گروه کولی آئروژن ها با تشکیل سریع گاز در طی تخمیر لاکتوز شناخته می‌شوند.
• باید توجه شود که عوامل مهاری در محیط کشت با مواد مغذی و مواد معدنی متعادل باشد.
• به طوری که اسپورهای کلستریدیوم و باسیلوس باعث شکل گیری واکنش مثبت کاذب نشوند مانند تشکیل گاز.
• محیط کشت برلیانت گرین بایل براث در تجزیه و تحلیل آب، لبنیات و مواد غذایی استفاده می‌شود.
• افزودن ۴-methylumbelliferyl-β-D-glukuronide (MUG)(BR0071) به این محیط باعث افزایش تشخیص اشرشیاکلی می‌شود.

آماده سازی محیط کشت BGBB

• ۴۰ گرم از محیط را در ۱ لیتر آب مقطر حل کنید.
• کمی حرارت دهید تا محیط کاملاً در آب حل شود.
• پس از حل شدن محیط، آن را داخل در حجم‌های ۱۰ میلی لیتری در لوله‌های آزمایش حاوی لوله دورهام تقسیم کنید.
• در دمای ۱۲۱ درجه سانتی گراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید.
• برای جلوگیری از تشکیل حباب داخل لوله‌های دورهام، اجازه دهید اتوکلاو دست کم تا دمای ۷۵ درجه سانتی گراد خنک شود و بعد در آن را باز کنید.

شرایط نگهداری 

پودر محیط داخل قوطی کاملاً در بسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی گراد و محیط آماده در دمای ۸-۲ درجه سانتی گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.

فرآیند آزمایش

• در صورت استفاده از نمونه مایع، مقدار ۱ میلی لیتر یا کمتر از نمونه را به ۱۰ میلی لیتر از محیط کشت اضافه کنید. اگر مقدار ۱۰ میلی لیتر از نمونه را مورد استفاده قرار می‌دهید، باید آن را به ۱۰ میلی لیتر از محیط کشت دوبار غلظت اضافه کنید. حتماً دقت کنید که محیط را خیلی رقیق نکنید.
• در صورت استفاده از نمونه‌های مواد غذایی جامد، تکه ای از نمونه را در آب بخیسانید و پس از تهیه رقت‌های ۱ به ۱۰ از آن، نمونه را به نسبت ۱۰ به ۱ به محیط کشت تلقیح کنید. در صورت افزودن حجم‌های بیشتری از نمونه، از محیط کشت دوبار غلظت استفاده کنید.
• برای شناسایی باکتری E.coli، پس از تلقیح نمونه داخل محیط آن را در دمای ۱±۴۴ درجه سانتی گراد به مدت ۴۸ ساعت گرما دهید.
• برای شناسایی سایر کلیفرم ها، گرماگذاری را در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی گراد  به مدت ۴۸ ساعت انجام دهید.

نتیجه و تفسیر

ایجاد کدورت و تغییر رنگ محیط به سبز-زرد نشانه رشد باکتری داخل لوله محیط کشت است. تشکیل گاز در لوله دورهام پس از ۴۸ ساعت گرماگذاری در ۲±۳۵ درجه سانتی گراد دال بر وجود باکتری‌های کلیفرم در نمونه است. در صورت مثبت بودن نتیجه آزمایش، باید تست­های تاییدی نیز انجام شود.

تشکیل گاز پس از گرماگذاری در دمای ۱±۴۴ درجه سانتی گراد نشانه­ وجود باکتری E. coli است. برای تایید، می­توان نمونه را در محیط کشت Peptone Water کشت داد و سپس تست وجود اندول را انجام داد.

کنترل کیفی محیط کشت BGBB

• ظاهر محیط دهیدراته: سبز/بژ رنگ، پودری و یکنواخت
• ظاهر محیط آماده: سبز و شفاف
• نتیجه کشت باکتری، پس از گرماگذاری در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی گراد و ۴±۴۴ درجه سانتی گراد به مدت ۴۸ ساعت