محیط کشت بروسلا آگار – Brucella

این محیط کشت میکروبی Brucella Agar که به نام محیط کشت بروسلا آگار نیز شناخته می شود، با مکملی برای غنی‌سازی، جداسازی و کشت گونه‌های بروسلا یا کمپیلوباکتر از نمونه‌های بالینی و غیربالینی توصیه می‌شود. بروسلا، یک انگل درون‌سلولی است که سبب سقط جنین در حیوانات و بیماری تب‌دار و یا عفونت‌های موضعی سیستم‌های استخوانی، بافتی انسان می‌شود. گونه‌های بروسلا بسیار فستیدیوس هستند و بنابراین نیاز به یک محیط غنی از مواد مغذی دارند تا بتوانند رشد کنند. همچنین، گونه‌های بروسلا بسیار آلوده‌کننده هستند و در هنگام دست زدن باید مراقبت شدید داشته باشند. محیط پایه (همراه با مکمل‌های کمپیلوباکتر) نیز، همچنین می‌تواند برای جداسازی کمپیلوباکتر استفاده شود. محیط کشت بروسلا یک محیط اصلاح شده است که برای پشتیبانی از رشد فزاینده باکتری‌های فستیدیوس مانند بروسلا، استرپتوکوک، پنوموکوک، لیستریا، نایسریا مننژیتیدیس و هموفیلوس آنفولانزا تشکیل شده است.

فرمولاسیون محیط کشت Brucella Agar

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.