محیط کشت بافر گلیسرول سالین بیس – glycerol saline

محیط Buffered glycerol saline base که به نام محیط کشت بافر گلیسرول سالین بیس نیز شناخته می‌شود، با افزودن گلیسرول در جمع‌آوری و انتقال نمونه‌های مدفوع استفاده می‌شود. نمونه‌هایی که بلافاصله پس از جمع‌آوری پردازش نمی‌شوند یا آنهایی که باید به یک آزمایشگاه مرجع دور فرستاده شوند، باید به‌درستی نگهداری شوند تا نمونه‌ها زنده بمانند. به‌طورکلی، اکثر نمونه‌ها باید در آزمایشگاه طی ۱ تا ۲ ساعت پس از جمع‌آوری، پردازش شوند. محیط Buffered glycerol saline base  اولین‌بار توسط Teague و Clurman ارائه شد و بعدها توسط Sachs اصلاح شد. این محیط حاوی کلرید سدیم است که یون‌های ضروری محیط را فراهم می‌کند. بافرهای فسفات همراه با گلیسرول برای بازیابی باکتری‌های بیماری‌زا مورداستفاده قرار می‌گیرند. محیط تهیه شده باید دارای رنگ صورتی روشن و pH کمی قلیایی باشد.

فرمولاسیون محیط Buffered glycerol saline base

• Sodium chloride            ۴٫۲۰۰
• Dipotassium phosphate           ۳٫۱۰۰
• Monopotassium phosphate           ۱٫۰۰۰
• Phenol red           ۰٫۰۰۳
• Final pH ( at 25°C) 7.2±۰٫۲

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.