محیط کشت بوشنل هاس براث – Bushnell Haas

محیط کشت میکروبی Bushnell-Haas Broth که به نام محیط کشت بوشنل هاس براث نیز شناخته می شود، برای مطالعه میکروبی مصرف‌کننده‌های، هیدروکربن مورداستفاده قرار می‌گیرد. فرمول ارائه شده توسط Bushnell و Haas برای ارزیابی توانایی میکروارگانیسم‌ها، برای تجزیه هیدروکربن‌ها استفاده می‌شود. این محیط شامل تمام مواد مغذی به جز منبع کربنه، لازم برای رشد باکتری‌ها است. فقط باکتری‌هایی که قادر به تجزیه هیدروکربن هستند، در این محیط رشد خواهند کرد. هیدروکربن می‌تواند به این محیط افزوده شود و استفاده از آن توسط میکروارگانیسم‌های مختلف مورد بررسی قرار گیرد. این باکتری‌ها می‌توانند انواع هیدروکربن‌ها، مانند نفت سفید، روغن معدنی، موم، پارافین و بنزین را تجزیه کنند.

اجزای تشکیل‌دهنده محیط کشت Bushnell-Haas Broth

• Magnesium sulphate  ۲۰۰
• Calcium chloride  ۰۲۰
• Monopotassium phosphate  ۰۰۰
• Dipotassium phosphate  ۰۰۰
• Ammonium nitrate  ۰۰۰
• Ferric chloride  ۰۵۰
• Final pH ( at 25°C) 7.0±۰٫۲

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.