محیط کشت کمپیلو باکتر انریچمنت براث – Campylobacter Enrichment

محیط کشت میکروبی Campylobacter Enrichment Broth Base که به نام محیط کشت کمپیلوباکتر انریچمنت براث بیس نیز شناخته می‌شود، مناسب برای غنی‌سازی انتخابی و کشت گونه‌های کمپیلوباکتر است. محیط غنی‌سازی Preston Enothment Broth برای کمک به احیاء کامپیلوباکتر دیده به‌شدت آسیب‌پذیر دارای یک‌پایه غنی است. انکوباسیون مقدماتی محیط کامل با آنتی‌بیوتیک به مدت ۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد برای کمک به احیای ارگانیسم‌های آسیب‌دیده و به دنبال آن ۴۲ درجه سانتیگراد به مدت ۱۸-۴۸ ساعت انجام می‌شود. هضم گوارشی بافت حیوانات و عصاره گاو در محیط، ازت، ویتامین‌ها و مواد معدنی لازم برای حمایت از رشد باکتری‌ها را تأمین می‌کند. مکمل انتخابی Preston (FD042) حاوی مواد ضدباکتری و ضدقارچ است. Polymyxin B فقط در برابر باکتری‌های گرم منفی فعال بوده و گونه‌های پروتئوس نیز گاهی اوقات مقاوم هستند. Trimethoprim معمولاً گونه‌های پروتئوس و سایر باکتری‌های گرم منفی را مهار کرده و ریفامپین در برابر ارگانیسم‌های گرم منفی نیز فعال است. سیکلوهگزیمید به‌عنوان ماده ضدقارچ عمل می‌کند. کشت مستقیم و غنی‌سازی برای نمونه‌های تازه مدفوع، محتویات مدفوع یا روده کافی است؛ زیرا تعداد زیادی از ارگانیسم‌ها پیش‌بینی می‌شود.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.