محیط کشت CAYE براث

محیط کشت CAYE Broth Modified، برای کشت E.coli بیماری‌زا برای تقویت تولید وروتوکسین، در طول رشد می‌باشد. Casaminoacids و عصاره مخمر باعث افزایش تولید وروتوکسین تولید شده از E. oli  محیط می‌شود. همچنین اثرات عناصر و pH بالا از تشکیل وروتوکسین در این محیط پشتیبانی می‌کنند.

روش آزمایشی و ارزیابی محیط CAYE Broth

۵-۶ کلونی تیپیکال را از محیط جداسازی کرده و داخل لوله آماده شده تلقیح کنید.

نگه‌داری محیط CAYE Broth

۶ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد بدون هم زدن.

فرمولاسیون محیط کشت CAYE Broth Modified 

Casaminoacids 20.0 ؛ عصاره مخمر ۶٫۰؛ D (+) گلوکز ۲٫۵ ؛ سدیم کلرید ۲٫۵؛ دی پتاسیم هیدروژن فسفات ۸٫۷۱؛ منیزیم سولفات ۰٫۰۵؛ کلرید منگنز ۰٫۰۰۵ . (g/litre)

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.