محیط کشت CCDA آگار

محیط کشت میکروبی CCDA که به نام محیط کشت Charcoal Cefoperozone Deoxycholate Agar نیز شناخته می‌شود، یک محیط کشت انتخابی برای جداسازی و شمارش گونه‌های کامپیلوباکتر (Campylobacter spp) از نمونه‌های آب، غذا و همچنین نمونه‌های مدفوع است. کشت بر روی صفحات CCDA  در شرایط دمایی ۳۷ یا ۴۲ درجه سانتیگراد انجام می‌شود و پس از ایجاد گسترش و انکوباسیون تحت یک فضای میکروآئروفیلی در حضور CO2 باید قرار گیرد. کلنی‌های کامپیلوباکتر به‌صورت هموار با لبه‌های صاف مشاهده می‌شود. در محیط کشت CCDA، اغلب کلنی‌ها شفاف و خاکستری‌های مایل به سفید با شفافیت فلزی دیده می‌شوند.

فرمولاسیون محیط CCDA

• Meat Extract     ۱۰٫۰
• Enzymatic Digest of Animal Tissues    ۱۰٫۰
• Enzymatic Digest of Casein      ۳٫۰
• Sodium Chloride      ۵٫۰
• Charcoal      ۴٫۰
• Sodium Deoxycholate      ۱٫۰
• Iron(II) Sulfate    ۰٫۲۵
• Sodium Pyruvate    ۰٫۲۵
• Agar     ۱۲٫۰
• Cefoperazone   ۰٫۰۳۲
• Amphotericin B     ۰٫۰۱

داکسی کولات سدیم (مهارکننده باکتری‌های روده‌ای گرم مثبت، به جز کمپیلوباکتر)

سولفات آهن (آهن (II) سولفات که خنثی‌کننده محصولات سمی اکسیژن است)

آمفوتریسین (مهار می‌کنند ه مخمر و قارچ‌ها)

cefoperazone (مهارکننده باکتری‌های روده‌ای که گرم منفی هستند به جز کمپیلوباکتر)

سدیم پیروات (خنثی‌سازی محصولات سمی اکسیژن)

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً حل نمایید و سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید، تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته و با تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید و ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود. بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40 . سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید و بعد درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید . بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نماید و پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید. طرز ساختن سایر محیط‌های کشت، همین‌طور می‌باشد

 منتهی بعضی از محیط‌های جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیط‌ها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند. برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم.