محیط کشت CATC آگار – سیترات آزید توئین کربنات آگار

محیط کشت CATC Agar Base که به نام محیط کشت Citrate Azide Tween Carbonate (سیترات آزید توئین کربنات آگار) نیز شناخته می‌شود، مناسب برای شناسایی انتروکوک در محصولات گوشتی، محصولات لبنی و سایر مواد غذایی استفاده می‌شود. انتروکوکسی ها ممکن است به‌عنوان بخش مهمی از نرمال فلورای بدن انسان و حیوانات در نظر گرفته شود. انتروکوک‌ها گستردگی وسیعی در محصولات غذایی به‌ویژه غذاهایی که از محصولات حیوانی تهیه شده‌اند، دارند. انتروکوک فکالیس و انتروکوک فاسیوم نسبتاً در برابر حرارت مقاوم هستند و ممکن است در روش پاستوریزه کردن سنتی شیر از بین نروند و ازآنجایی‌که انتروکوک فاسیوم مقاوم به حرارت می‌باشد یکی از عوامل فساد در گوشت‌های کنسرویی است. اکثر انتروکوک‌ها نسبت به انجماد هم مقاوم هستند به‌غیراز اشرشیا کولی. Tween 80 به‌عنوان یک خنثی‌کننده عمل می‌کند که در صورت وجود مواد ضدعفونی‌کننده در نمونه‌ها باعث خنثی‌شدن آنها می‌شود. غلظت بالای سیترات باعث مهار رشد دیگر نرمال فلورهای به‌غیراز انتروکوک‌ها می‌شود در محیط کشت CATC Agar Base می‌باشد.

اجزای تشکیل‌دهنده محیط  CATC Agar Base

Gms / Litre

• Casein enzymic hydrolysate    ۱۵٫۰۰۰
• Yeast extract     ۵٫۰۰۰
• Potassium dihydrogen phosphate    ۵٫۰۰۰
• Sodium citrate   ۱۵٫۰۰۰
• Tween 80    ۱٫۰۰۰
• Agar   ۱۵٫۰۰۰

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً حل نمایید و سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید، تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید و ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود. بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40 . سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید و بعد درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید و پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید. طرز ساختن سایر محیط‌های کشت، همین‌طور می‌باشد منتهی بعضی از محیط‌های جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیط‌ها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند. برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم.