محیط کشت Cycloserine Cefoxitin Fructose Agar (CCFA)

محیط کشت Cycloserine Cefoxitin Fructose Agar (CCFA) یک محیط غنی ، انتخابی و افتراقی است که برای جداسازی و شناسایی احتمالی کلستریدیوم دیفیسیلسیل ، یک علت شناخته شده از کولیت pseudomembraneous (عامل ضد میکروبی مرتبط با عامل) استفاده می شود. CCFA یک محیط غنی ، انتخابی و افتراقی برای جداسازی Clostridium difficile می باشد. پایه اصلی مغذی از پپتون و فروکتوز تشکیل شده است، و با غلظت سفتوکسیتین و سیکلوسرین که مانع از رشد نرمال ترین فلور مدفوع می شود، تکمیل می شود. سیکلوسرین باکتریهای گرم منفی را مهار می کند ، در حالی که سفوکسیتین هر دو ارگانیسم های گرم مثبت و گرم منفی را مهار می کند. Clostridium difficile در CCFA مهار نمی شود، و هنگامی که رشد می کند، یک مورفولوژی با کلنی زرد و شیشه ای را نشان می دهد. نوترال رد به عنوان یک شاخص pH اضافه می شود. وجود C. difficile به دلیل استفاده از اسیدهای آمینه توسط ارگانیسم ، باعث از بین رفتن رنگ صورتی/ نارنجی به زرد می شود و pH کلی را افزایش می دهد و باعث تغییر رنگ شاخص می شود. این رسانه در شرایط عاری از اکسیژن تهیه ، توزیع و بسته بندی می شود تا از تشکیل محصولات اکسیده شده قبل از استفاده جلوگیری کند.

طرز تهیه کلی محیط های کشت :

همانطوریکه می دانید محیطهای کشت به سه دسته جامد ، نیمه جامد ، مایع تقسیم می شوند . محیطهای مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است . مثلاً حدود ( ۲/۰%) و محیط های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم وبالاخره محیط های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .

برای ساختن محیط های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌ کنیم. در روی این شیشه ها ترکیب محیط بطور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است . مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده ودر مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته اید اضافی نموده و آنرا کاملاً‌ حل نمائید وسپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید ، تا زمان جوشیدن آنرا چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و بمدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد ، آنرا برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید وظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود . بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40 . سپس در حالیکه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید ، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید وبعد درون پلیت های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید . بعد پلیت ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند وازتکان دادن آن خودداری نمائید وپس از جامد شدن محیطهای کشت نوترینت آگار را جمع کرده ودر c37⁰ بمدت ۲۴ ساعت قرار دهید . اگر محیط ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی گراد قرار می‌دهید .

طرز ساختن سایر محیطهای کشت، همینطور می‌باشد منتهی بعضی از محیطهای جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیطها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند .

برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم .

لینک های مفید:

• مشاهده محصولات گروه میکروبی
• محصولات سلولی