محیط کشت کلمبیا آگار بیس – Columbia

محیط کشت میکروبی Columbia Agar Base که به نام محیط کلمبیا اگار بیس نیز شناخته می‌شود. محیط کشت Columbia Agar Base برای استفاده در تشخیص بیماری یا سایر شرایط در انسان در نظر گرفته نشده است. این محیط با تغییر در فرمول پایه کلمبیا آگار، Columbia Agar Base  وسیله‌ای را فراهم می‌کند که برای استفاده با خون دفع شده اسب و گوسفند مناسب باشد. مخلوط پپتون منبع نیتروژن، ویتامین‌های ضروری و اسیدهای آمینه را فراهم می‌کند. نشاسته منبع کربن را فراهم می‌کند و کلرید سدیم تعادل اسمزی را حفظ می‌کند. ابتدا توسط النر و همکاران به‌عنوان یک محیط عمومی آگار مغذی مورداستفاده قرار گرفت. کلمبیا آگار هنگامی که با افزودن خون استریل غنی شده باشد، بیشتر مورداستفاده قرار می‌گیرد. این محیط برای حمایت از رشد و تعیین واکنش‌های همولیتیک انواع میکروارگانیسم‌ها مناسب است.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .

برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً حل نمایید و سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید، تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید و ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود. بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40 . سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید و بعد درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید . بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نماید و پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید. طرز ساختن سایر محیط‌های کشت، همین‌طور می‌باشد منتهی بعضی از محیط‌های جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیط‌ها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند. برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم.