توضیحات

محیط کشت میکروبی Columbia Blood Agar Base که به نام محیط کشت کلمبیا بلاد آگار بیس نیز شناخته می‌شود، مناسب، برای رشد باکتری‌های سخت رشد، ایجاد کلنی‌های بزرگ، هاله همولیز واضح و تمایز خوب کلونی‌ها می‌باشد. محیط کشت کلمبیا بلاد آگار یک محیط پایه می‌باشد و برای اولین‌بار در سال 1966 توسط النر و همکارانش ساخته شده است. محیط کشت کلمبیا بلاد آگار با 5٪ خون گوسفند یک ماده غذایی کاملاً مغذی برای جداسازی و پرورش میکروارگانیسم‌های کند رشد و تند رشد از نمونه‌های مختلف بالینی و غیربالینی می‌باشد. کلمبیا بلاد آگار با افزودن خون استریل غنی‌سازی می‌شود. در واقع این محیط که یک بلاد آگار بهبودیافته است، باعث رشد سریع و سرزنده، بهبود تولید رنگ‌دانه‌ها، مورفولوژی کلنی معمولی و شناسایی واکنش‌های همولیتیک می‌شود.

طرز تهیه محیط کشت کلمبیا بلاد آگار

1. ۴۰ گرم از پودر در یک لیتر آب مقطر یا آب دیونیزه در یک ارلن شیشه‌ای به طور کامل مخلوط شود.
2. ارلن شیشه‌ای را حرارت داده و می‌گذاریم به مدت یک دقیقه بجوشد تا کاملاً پودر حل شود.
3. ظرف را به مدت ۱۵ دقیقه در ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد اتوکلاو می‌کنیم. سپس می‌گذاریم تا دمای ۴۵-۵۰ درجه خنک شود.
4. سپس خون ۵% استریل و دفیبرینه را به آن اضافه می‌کنیم.
5. محیط کشت را در ظروف استریل پتری دیش می‌ریزیم و یا در لوله‌های استریل توزیع می‌کنیم.
6. می‌توانید برای اطمینان از صحت تهیه محیط کشت از کشت‌های مشخص و استاندارد جهت کنترل استفاده کنید.

 ترکیبات محیط کشت کلمبیا بلاد آگار بیس

• Heart Muscle, Infusion from (solids)، پپتون کازئین و عصاره مخمر: سبب تأمین نیتروژن، کربن، اسیدهای آمینه و ویتامین‌ها می‌شود.
• سدیم کلرید: تعادل اسمزی را حفظ می‌کند.
• آگار: جهت جامد کردن محیط است.

موارد استفاده از محیط کشت کلمبیا بیس آگار

محیط کشت کلمبیا آگار به‌عنوان یک محیط جداکننده اولیه که اغلب از آن استفاده می‌شود برای جداسازی میکروارگانیسم‌های کند رشد و تند رشد از نمونه‌های بالینی توصیه می‌شود. محیط کشت Columbia Agar محیط جداکننده اولیه است که اکثر میکروارگانیسم‌ها مانند انتروباکتریاسه، سودوموناس و سایر باسیلوس‌های گرم منفی غیر تخمیری، استرپتوکوک‌ها، انتروکوک‌ها، استافیلوکوک‌ها، گونه‌های کاندیدا و بسیاری دیگر روی آن رشد می‌کنند.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً حل نمایید و سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید، تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید و ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود. بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40 . سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید و بعد درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید . بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید و پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید. طرز ساختن سایر محیط‌های کشت، همین‌طور می‌باشد منتهی بعضی از محیط‌های جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیط‌ها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند. برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم.