محیط کشت کلمبیا براث – Columbia

محیط کشت میکروبی Columbia broth که به نام محیط کشت کلمبیا براث نیز شناخته می شود، مایع ای حاوی پپتون و عصاره مخمر، نیتروژن، کربن، ویتامین‌ها و مواد مغذی است. دکستروز به‌عنوان منبع انرژی اضافی کربن را فراهم می‌کند. محیط کشت توسط  Tris به‌صورت مایع است. سیستئین به‌عنوان عامل کاهش‌دهنده عمل می‌کند و منیزیم و آهن برای تسهیل رشد افزوده می‌شوند. محیط مایع کلمبیا، در حضور CO2 و ساپلمنت  SPS، یک محیط کشت خون بسیار عالی است.

مورلو و النر در سال 1969 یک محیط براث و مایع برای بازیابی میکروارگانیسم ها از کشت خون ابداع کردند. این محیط کشت از محیط پایه خون کلمبیا آگار که قبلا توسط النر و همکاران فرموله شده بود، ابداع شد. در حین مطالعه متوجه شدند که کلمبیا براث برای رشد سریعتر استافیلوکوکوس اورئوس نسبت به محیط کشت معمول آن برتری دارد. افزایش غلظت سیستین برای بهبود میکروارگانیسم های هوازی و بی هوازی از نمونه های خون ارائه می شود. محیط کلمبیا بیس با SPS (سدیم پلی اتول سولفونات)، یک ضد انعقاد پلی آنیونی می باشد و با فعالیت لیزوزیم، با فاگوسیتوز تداخل کرده و آمینوگلیکوزیدها را غیرفعال می کند. تفاوت آن با محیط بیس آگار در حذف نشاسته ذرت است. محیط حاوی پپتون ویژه، بیوپپتون و تزریق قلب برای حمایت از رشد مجلل موجودات است.

کاربرد محیط کشت Columbia broth

محیط کشت کلمبیا براث محیطی مناسب برای گونه های استافیلوکوکوس اورئوس، اشریشیا کلی، استرپتوکوک ویریدانس و انتروکوک می باشد.

کنترل کیفی محیط کشت Columbia broth

• ظاهر: شفاف و استریل در بطری شیشه ای
• رنگ: محلول شفاف کهربایی روشن
• نتایج:پس از انکوباسیون در دمای 35-37 درجه سانتی گراد به مدت 18-48 ساعت مشاهده می شود.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت 

همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .

برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً حل نمایید و سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید، تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید و ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود. بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید و بعد درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید . بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید و پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید. طرز ساختن سایر محیط‌های کشت، همین‌طور می‌باشد منتهی بعضی از محیط‌های جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیط‌ها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند. برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم.