معرف رنگ آمیزی حیاتی 520 (با امکان فیکس سلولی) سیتومتین ژن

معرف FVS520 از برند سیتومتین ژن برای تمایز سلول های زنده از غیرزنده در پستانداران مفید است. این رنگ با آمین های سطح سلولی و درون سلولی واکنش داده و به صورت کووالانسی به آن متصل شده سپس در روش فلوسایتومتری با توجه به نور منتشر شده حیات سلول بررسی می شود.

رنگ آمیزی حیاتی و انواع آن

در رنگ آمیزی حیاتی بررسی زنده بودن سلول ها از روش فلوسایتومتری به کمک دو گروه رنگ صورت می گیرد. رنگ های فلورسانت، خاصیت ویژه‌ای دارند که می توانند در طول موج مشخصی از نور، فوتون های پرانرژی را به خود جذب کنند. الکترون های آن در اثر برانگیختگی به تراز های بالا رفته سپس بلافاصله انرژی خود را از دست داده و با نشر نور در طول موج هایی بلندتر از نور اولیه، به تراز های پایین باز می گردد.

رنگ هایی که بر اثر نفوذ پذیری غشا وارد سلول شده به اجزا داخل سلولی مانند نوکئوتید ها متصل می شوند.

رنگPI (Propidium Iodide) به دلیل وجود ید، یک ترکیب قرمز رنگ که نور با طول موج 533 نانومتر را جذب کرده و بازنشری در طول موج 617 نانومتر منتشر می کند. طول موج 533 نانومتر در محدوده رنگ سبز قرار گرفته و برای تاباندن نور با این طول موج از فیلتر سبز میکروسکوپ فلورسانت استفاده می شود. پس از دریافت نور در این طول موج، ترکیب کروموفور پروپیدیوم یدید، نوری با طول موج 617 نانومتر بازنشر می کند که این طول موج نیز در محدوده رنگ نارنجی تیره یا قرمز قرار گرفته است. پروپیدیوم یدید (PI) نیز توانایی اتصال به نوکلئیک اسید ها را داشته ولی توانایی نفوذ به سلول های زنده را ندارد. این رنگ توسط سلول های غیر زنده و سلول هایی با غشای در حال تکه تکه شدن جذب می شود.

رنگ هایی که از غشای سلول سالم عبور کرده، توسط آنزیم ها دچار تغییر شیمیایی و در نهایت تبدیل به مولکول فلورسنت شده است. در صورت آسیب به غشای سلول این مواد فلوروسنت از سلول خارج شده به این نوع رنگ های حیاتی، رنگ های فعال شونده با آنزیم می گویند.

رنگ AO (Acridine Orange) یک ترکیب نارنجی رنگ که نور با طول موج 500 نانومتر را جذب کرده و بازنشری در طول موج 526 نانومتر ایجاد می کند. طول موج 500 نانومتر در محدوده رنگ آبی روشن می باشد و برای تاباندن نور با این طول موج از فیلتر آبی میکروسکوپ فلورسانت استفاده می شود. پس از دریافت نور در این طول موج، ترکیب کروموفور آکریدین اورنج، نوری با طول موج 526 نانومتر بازنشر می کند که این طول موج در محدوده رنگ سبز قرار گرفته است. لذا رنگی که از تاباندن نور آبی به آکریدین اورنج حاصل می شود، سبز است.

نتایج فلوسایتومتری

در رنگ آمیزی AO/PI، از هر سلولی دو عکس در فیلتر های آبی و سبز گرفته و نهایتا این دو عکس را باهم ترکیب می کنند. اگر در عکس ترکیب شده، سلولی فقط به رنگ سبز دیده شود نشان دهنده‌ی زنده بودن سلول (Viabile Cell) می باشد. اگر به رنگ قرمز دیده شود نشان دهنده‌ی نکروز شدن سلول (Necrotoc Cell) می باشد. اگر سلولی در فیلتر سبز رنگ قرمز را نشان دهد و همچنین در فیلتر قرمز رنگ سبز را از خود نشان دهد در ترکیب دو عکس به رنگ نارنجی در می آید که نشان دهنده سلول های آپوپتوز شده (Apoptotic Cell) می باشد.