محیط کشت GN براث – جی ان

محیط کشت میکروبی GN Broth که به نام جی آن براث نیز شناخته می‌شود، مناسب برای غنی‌سازی انتخابی ارگانیسم‌های گرم منفی در تنظیمات آزمایشگاهی کاربرد دارد. این محیط کشت برای اهداف تشخیصی بیماری‌ها و سایر وضعیت‌های مربوط به انسان کاربردی ندارد. این محیط کشت به‌عنوان محیط کشت غنی شده برای باسیل‌های گرم منفی روده به‌خصوص گونه سالمونلا و شیگلا کاربرد دارد. بعدها دو محقق به نام‌های Croft و Miller بهبود گونه شیگلا را با استفاده از این محیط کشت نسبت به استفاده از تلقیح مستقیم در آگار را به اثبات رساندند. Taylor and Schelhart هم دو محققی بودند که بهبود گونه‌های سالمونلا و شیگلا را در این محیط کشت نسبت به تلقیح مستقیم در محیط کشت به اثبات رساندند. این دو محقق همچنین دریافتند که در ماده غنی سلنیت برای بهبود گونه شیگلا، این محیط کشت نقش برتری دارد. محیط کشت GN Broth(Hajna به‌عنوان محیط کشت غنی شده غیرانتخابی در بهبود گونه سالمونلا و شیگلا از غذاها به کار می‌رود.

ترکیبات محیط کشت میکروبی GN Broth

• کازئین هضم شده آنزیمی ۱۰ گرم بر لیتر
• بافت حیوانی هضم شده آنزیمی ۱۰ گرم بر لیتر
• دکستروز ۱ گرم بر لیتر
• مانیتول ۲ گرم بر لیتر
• سدیم سیترات ۵ گرم بر لیتر
• سدیم دئوکسی کولات ۰٫۵ گرم بر لیتر
• دی پتاسیم فسفات ۴ گرم بر لیتر
• مونوپتاسیم فسفات ۱٫۵ گرم بر لیتر
• سدیم کلراید ۵ گرم بر لیتر
• PH نهایی در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد باید حدود ۷٫۰ باشد.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت 

همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .

برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً حل نمایید و سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید، تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید و ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود. بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود c45⁰– 40. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید و بعد درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید و پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون آورده و در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید. طرز ساختن سایر محیط‌های کشت، همین‌طور می‌باشد منتهی بعضی از محیط‌های جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیط‌ها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند. برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله‌ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم.