محیط کشت انتخابی هلیکوباکتر پایلوری – Helicobacter pylori

محیط کشت میکروبی Helicobacter pylori Selective Medium Base که به نام محیط کشت انتخابی هلیکوباکتر پایلوری نیز شناخته می شود، مناسب برای جداسازی هلیکوباکترپیلوری از نمونه‌های کلینیکی می‌باشد. هلیکوباکترپیلوری با تعدادی از وضعیت‌های مربوط به معده، عفونت‌های مربوط به معده و زخم‌های معده ارتباط دارد. مکمل انتخابی هلیکوباکترپیلوری (Dent) از گسترش و پیشرفت محیط کشت انتخابی Dent که برای جداسازی H. pylori از بیوپسی معده استفاده می‌شود، به‌دست‌آمده است. این محیط کشت از دست‌کاری روی محیط کشت ۴ در پلی میکسین B که با سفزولودین و آمفوتریسین B که برای جلوگیری از رشد گونه‌های کاندیدا افزوده می‌شوند، توسط محققی به نام  Skirrow به دست آمد. وقتی که در آزمایشگاه به طور معمول برای ۱۰۰ بیوسی معده به کار گرفته شد، محیط کشت Dent میزان سرعت جداسازی بالاتری برای هلیکوباکترپیلوری نشان داد، آن هم زمانی که این میکروارگانیسم توسط میکروارگانیسم‌های دیگر آلوده شده بود و این ریت جداسازی بالاتر در مقایسه با محیط‌های کشت Skirrow و همچنین محیط کشت بلاد آگار می‌باشد. تهیه یک ماده انتخابی مناسب برای H. pylori به تعیین نقش این ارگانیسم در اتیولوژی بیماری معده کمک خواهد کرد.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.