توضیحات

محیط کشت میکروبی Lactose Sulfite Broth که به نام محیط کشت لاکتوز سولفیت براث نیز شناخته می‌شود، مناسب برای تشخیص و شمارش Clostridium perfringens در محصولات دارویی کاربرد دارد. گونه‌های کلستریدیا یکی از دلایل عمده مسمومیت غذایی و بیماری‌های دستگاه گوارش هستند. این جانداران، باکتری‌های گرم مثبتی می‌باشند که میله‌های تشکیل‌دهنده اسپور دارند و این مرحله به طور طبیعی در خاک انجام می‌شود. Clostridium perfringens به طور معمول در موارد عفونت زخم و اسهال یافت می‌شوند. استفاده از سم‌ها برای آسیب رساندن به میزبان یکی از متدهایی است که برای که توسط باکتری‌های بیماری‌زا استفاده می‌شود. بیشترین فاکتور ویرولانس باکتری C. perfringens انتروتوکسین CPE می‌باشد که به‌محض حمله از روده میزبان ترشح می‌شود و در مسمومیت غذایی و سایر بیماری‌های دستگاه گوارش کمک می‌کند. این محیط کشت برای تست‌های نیمه کیفی، حضور یا عدم حضور  C. perfringens در محصولات دارویی که میزان این‌گونه‌ها ملاک کیفیت می‌باشد.

ترکیبات Lactose Sulfite Broth

• کازئین هضم شده آنزیمی ۵٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• عصاره مخمر ۲٫۵۰۰ گرم بر لیتر
• سدیم کلرید ۲٫۵۰۰ گرم بر لیتر
• لاکتوز ۱۰٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• L – سیستئین هیدروکلراید ۰٫۳۰۰ گرم بر لیتر
• PH نهایی در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد بید حدود ۷٫۱ باشد.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود.
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.