محیط کشت LSB – LTB – لوریل سولفات براث

محیط کشت LSB – LTB که به نام محیط کشت لوریل سولفات براث (lauryl sulphate broth) نیز شناخته می‌شود، یک محیط کشت انتخابی (براث) برای کالیفرم ها است و برای تشخیص باکتری‌های کالیفرم در آب و فاضلاب در محیط آزمایشگاهی استفاده می‌شود. گروه کالیفرم باکتری شامل باکتری‌های بی‌هوازی و بی‌هوازی مطلق، گرم منفی است که باعث تخلیه لاکتوز و تشکیل اسید و گاز در دمای ۳۵ درجه سلسیوس در عرض ۴۸ ساعت می‌شوند.

اعضای Enterobacteriaceae اکثریت این گروه را تشکیل می‌دهند؛ اما ارگانیسم‌هایی مانند Aeromonas spp ممکن است در این گروه گنجانده شود روش‌هایی برای شناسایی و تأیید کالیفرم ها در آزمایش آب، غذاها، محصولات لبنی و سایر مواد استفاده می‌شود.

آماده‌سازی محیط LSB – LTB 

• ۳۵/۶ گرم از محیط را در ۱ لیتر آب مقطر حل کنید. کاملاً مخلوط کنید.
• به‌آرامی حرارت دهید تا محیط کاملاً در آب حل شود.
• پس از حل‌شدن محیط، آن را داخل لوله‌آزمایش حاوی لوله دورهام تقسیم کنید.
• در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید.
• برای جلوگیری از تشکیل حباب داخل لوله‌های دورهام، اجازه دهید اتوکلاو دست‌کم تا دمای ۷۵ درجه سانتی‌گراد خنک شود و بعد در آنرا باز کنید.

شرایط نگهداری محیط LSB – LTB 

پودر محیط داخل قوطی کاملاً دربسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی‌گراد و محیط آماده در دمای ۸-۲ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.

فرآیند آزمایش

• نمونه‌ها را در پلیت کشت دهید و به مدت 4۴۸-۲۴ ساعت در شرایط هوازی در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی‌گراد گرماگذاری کنید.

محیط کشت چگونه عمل می‌کند؟

محیط lauryl-sulphate، همچنین به‌عنوان Lauryl Tryptose Broth اشاره شده است که مطابق فرمول Mallmann و Darby تهیه شده است. بر اساس تحقیقات، سدیم لوریل سولفات بهترین نتایج را برای مهار ارگانیسم‌های غیر از کالیفرم نشان داده است. محیط lauryl-sulphate، به‌اختصار LSB، در مرحله پیش‌فرض متد تخمیر کامل کالیفروم استاندارد، در بررسی آب و تشخیص کولیفرم از غذاها مورداستفاده قرار می‌گیرد.

نمونه‌هایی که در تولید گاز مثبت هستند به (Brilliant green lactose bile broth (BLGB منتقل می‌شوند تا توانایی رشد در حضور صفرا را نشان دهند و برای ۴۸ ساعت در دمای ۹۵ درجه فارنهایت (۳۵ درجه سانتیگراد) باید بتوانند گاز تولید کنند. حامل‌های اسپور هوازی به طور کامل در این محیط مهار می‌شوند. تریپتوز و مواد ضروری رشدی مانند ترکیبات نیتروژن و کربن، مواد سولفات دار این ردیابی را فراهم می‌کند.

در محیط کشت lauryl-sulphate فسفات پتاسیم سیستم بافر را فراهم می‌کند، درحالی‌که سدیم کلراید تعادل اسمزی را حفظ می‌کند. نشان‌داده‌شده است که افزودن سدیم لوریل سولفات باعث می‌شود که محیط برای انتخاب باکتری‌های کولی فرم انتخابی می‌شود.

محیط Lauryl Sulphate Broth همچنین توسط کمیته ISO برای تشخیص کالیفرم ها توصیه شده است.

نتیجه و تفسیر محیط کشت لوریل سولفات براث

• چنانچه کشت در پلیت انجام شده باشد، هرگونه سیاه شدن رنگ محیط کشت در پلیت نشان‌دهنده واکنش مثبت و عدم سیاه شدن آن نشان‌دهنده واکنش منفی خواهد بود.
• در مواردی که نمونه در محیط کشت آماده شده به‌صورت اسلنت (مایل در لوله) کشت داده شده باشد، اگر پس از ۴۸-۲۴ ساعت از نیمی از اسلنت سیاه شده باشد، نتیجه آزمایش مثبت و چنانچه پس از این مدت کمتر از نیمی از آن سیاه شده یا اصلاً سیاه نشده باشد، نتیجه آزمایش منفی گزارش خواهد شد.

نکات تکمیلی محیط lauryl sulphate broth

• سویه‌هایی از باکتری‌های لاکتوکوکوس، لوکونوستوک و پدیوکوکوس از عفونت‌های انسانی جدا شده‌اند که واکنش مثبتی در این محیط کشت داشته‌اند.
• ندرتاً سویه‌هایی از استرپتوکوک‌های ویریدانس قادر به سیاه کردن محیط کشت بایل اسکولین آگار و ایجاد واکنش مثبت ضعیفی می‌باشند.

کنترل کیفی محیط کشت لوریل سولفات براث

• ظاهر پودر: کاهی رنگ / بژ، یکدست و پودری – گاهی وجود مقادیر بسیار کم از دانه‌های تیره‌رنگ.
• ظاهر محیط آماده: محلول کهربایی تیره مایل به زیتونی با هاله آبی‌رنگ، کمی کدر
• نتیجه کشت باکتری در شرایط هوازی پس از گرماگذاری در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۸-۴۲ ساعت