محیط کشت ال بی براث لنوکس – LB Broth Lennox

محیط کشت میکروبی LB Broth Lennox که به نام محیط کشت ال بی براث لنوکس نیز شناخته می‌شود، مناسب برای مطالعات مربوط به ژنتیک مولکولی می‌باشد و برای اهداف تشخیصی بیماری‌ها و سایر وضعیت‌های مربوط به انسان کاربرد ندارد. این محیط کشت بر اساس محیط کشت L Broth می‌باشد که توسط Lennox توضیح داده شد و برای رشد و نگه‌داری نژاد اشریشیا کلی ای که در مطالعات میکروبیولوژی مولکولی استفاده می‌شود، کاربرد دارد. این محیط کشت، از نظر مواد مغذی، بسیار غنی می‌باشد و برای جداسازی نژادهای نوترکیب خالص فرموله شده است.

اشریشیا کلی در فاز لگاریتمی تأخیری بر روی محیط LB Broth رشد می‌کند. بعضی از وکتورهای پلاسمیدی ممکن است به تعداد زیاد تکثیر شوند. درحالی‌که برخی دیگر از وکتورها ممکن است برای تکثیر نیاز به محرک داشته باشند. برای جلوگیری از سنتز میزبان می‌توان کلرامفنیکول اضافه کرد. در نتیجه با این روش می‌توان از تکثیر کروموزوم باکتریایی جلوگیری کرد.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود .
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.