محیط کشت EMB Agar که به نام محیط ائوزین متیلن بلو (Levine, Eosin Methylene Blue Agar) شناخته می‌شود، محیطی انتخابی جهت جداسازی و افتراق باکتری E.coli و Enterobacter و همچنین شناسایی سریع Candida albicans می‌باشد.

آماده‌سازی محیط کشت EMB Agar

• ۳۶ گرم از پودر محیط را در یک لیتر آب مقطر حل کنید.
• به‌آرامی حرارت داده و به مدت چند ثانیه بجوشانید تا محیط به طور کامل حل شود.
• محیط کشت را در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید.
• محیط را تا ۶۰ خنک کنید و به‌خوبی تکان دهید تا هم متیلن بلو داخل محیط اکسیده شود (رنگ آبی خود را بازیابد) و هم رسوب داخل محیط که بخش مهمی از محیط است، دوباره شناور شود.
• محیط را در پلیت پخش کنید.

شرایط نگهداری محیط کشت EMB Agar

پودر محیط داخل قوطی کاملاً دربسته و در دمای زیر ۳۰ درجه سانتی‌گراد و محیط آماده در لوله در دمای ۸-۲ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.

فرآیند آزمایش

• نمونه‌ها را به روش اسپردینگ در سطح پلیت تلقیح کنید.
• پلیت‌ها را به مدت ۲۴-۱۸ ساعت در دمای ۳۵ درجه سانتی‌گراد گرماگذاری کنید. از تابش نور به پلیت‌ها جلوگیری کنید. چنانچه نتایج کشت پس از ۲۴ ساعت منفی بود، پلیت‌ها را مجدداً به مدت ۲۴ ساعت دیگر گرماگذاری کنید.

نتیجه و تفسیر

کلیفرم ها از جمله باکتری‌های گرم منفی تخمیرکننده لاکتوز هستند که به علت شرایط اسیدی که در اثر رشد و تخمیر قند توسط آنها در محیط EMB بوجود می‌آید، موجب واکنش رنگ‌ها شده که باعث ایجاد جلای فلزی سبزرنگ در کلنی‌هایشان می‌شوند.

خصوصیات تیپیک ظاهری برخی از کلیفرم ها به شرح زیر می‌باشد:

• باکتری Escherichia coli دارای کلنی‌های بزرگ آبی- سیاه با جلای فلزی می‌باشد.
• باکتری‌های Enterobacter/ Klebsiella کلنی‌های بزرگ و موکوئیدی به رنگ آبی – سیاه تولید می‌کنند.
• باکتری‌های Proteus، Salmonella و Shigella دارای کلنی‌های بزرگ و بی‌رنگ هستند.
• باکتری Pseudomonas کلنی‌هایی با اشکال نامنظم و بی رنگ خواهند داشت.

کنترل کیفی محیط کشت EMB Agar

• ظاهر پودر: پودری، یکدست و به رنگ صورتی- قرمز که ممکن است دانه‌های قرمز رنگی همراه داشته باشد.
• ظاهر محیط آماده: کمی کدر و به رنگ سبز نارنجی قهوه ای.
• نتیجه کشت باکتری در شرایط بی هوازی پس از گرماگذاری در دمای ۲±۳۵ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴-۱۸ ساعت

نکات تکمیلی 

• برخی از سویه‌های سالمونلا و شیگلا، به دلیل حضور ائوزین و متیلن بلو در ترکیب این محیط، رشد نمی‌کنند.
• برخی از سویه‌های باکتری‌های گرم مثبت مانند انتروکوک‌ها، استافیلوکوک‌ها و مخمرها می­توانند بر روی این محیط کشت رشد کرده و کلنی‌های سرسوزنی تولید کنند.
• باکتری‌های غیر بیماریزای غیر تخمیر کننده لاکتوز نیز ممکن است بتوانند برروی این محیط رشد کنند. بنابراین برای شناسایی دقیق‌تر این ارگانیسم‌ها از سویه‌های بیماری زا بایستی از برخی از تست‌های بیوشیمیایی نیز استفاده کرد.