بررسی بیان ژن با کمک سوبسترا و آنزیم در سیستم سنجش لوسیفراز

سیستم سنجش لوسیفراز چیست؟

زمانی می‌توان بیان ژن را بررسی کرد که عملکرد پروموتر آن را به کمک ژن گزارشگرش مطالعه کنیم. آنزیم‌های لوسیفراز به طور ایده‌آل برای سنجش‌های ژن‌های گزارشگر مناسب هستند. با مکانیسم ساده مبتنی بر نور و حساسیت بالا که می‌تواند حتی تغییرات کوچک را بیان کند. سیستم سنجش لوسیفراز نسبت به روش‌های سنجش مرسوم از نظر حساسیت و سادگی به طور قابل‌توجهی بهبودیافته است. نور با تبدیل به انرژی شیمیایی لوسیفرین را اکسید و در نتیجه انتقال الکترون صورت می‌گیرد و محصول اکسی لوسیفرین را تشکیل می‌دهد. آنزیم لوسیفراز، یک پروتئین مونومر 61 کیلو دالتونی است که اکسیداسیون لوسیفرین را با استفاده از ATP-Mg2+ به‌عنوان یک سوبسترا کاتالیز می‌کند. نور تولید شده پایداری کمی دارد و به‌سرعت تجزیه می‌شود. برای حل این مشکل شود از کوآنزیم A (CoA) برای بهبود سینتیک استفاده شده که امکان گردش آنزیمی بیشتر و در نتیجه افزایش شدت نور تقریباً برای حداقل 1 دقیقه ثابت را ایجاد می‌کند.

مکانیسم سیستم سنجش لوسیفراز

اساس سیستم سنجش لوسیفراز به این صورت می‌باشد که ترکیب حامل ژن گزارشگر و معرف‌های تشخیصی است که بستری برای تبدیل فعالیت آنزیم لوسیفراز به سیگنال نوری فراهم می‌کند. سنجش با اندازه‌گیری لوسیفراز با استفاده از یک لومینومتر تک لوله‌ای یا یک لومینومتر صفحه‌ای صورت می‌گیرد.

کاربرد سیستم سنجش لوسیفراز

درحالی‌که ژن‌های گزارشگر اغلب برای ارزیابی تغییرات در فعالیت پروموتر استفاده می‌شوند اما می‌توان از آن‌ها برای بررسی انتقال سیگنال، عملکرد پروتئین، تنظیم miRNA و حتی اندازه‌گیری زمان واقعی فرایندها در موجودات زنده مورداستفاده قرار گیرند.

نکات تکمیلی

• سوبسترا این محصول به‌صورت پودر لیوفلیزه در کنار بافر آن قرار گرفته.
• لیز سلولی به کمک بافر آن حدود 5 دقیقه زمان می‌برد.

بافرهای لیز سلولی به تفکیک سلول‌ها

• سلول‌های پستانداران در کشت چسبنده   CCLR، RLB، PLB
• سلول‌های پستانداران در کشت غیرچسبنده  CCLR، RLB، PLB
• سلول‌های باکتریایی  CCLR
• سلول‌های گیاهی CCLR