توضیحات

محیط کشت میکروبی Lysine Iron Agar که به نام محیط کشت لایزین آیرون آگار نیز شناخته می‌شود، برای افتراق ارگانیسم‌های روده به‌خصوص سالمونلا آریزونا بر اساس توانایی این میکروارگانیسم‌ها در دکربوکسیله کردن و همچنین دآمینه کردن لایزین برای شکل‌گیری هیدروژن سولفید (H2S) به کار می‌رود. این محیط کشت توسط دو دانشمند به نام‌های  Edwards and Fife برای تشخیص سالمونلاهای تخمیرکننده لاکتوز به کار می‌رود. سالمونلا به‌عنوان محیط میکروارگانیسمی شناخته می‌شود که می‌تواند لایزین را خیلی سریع دکربوکسیله کرده و مقدار زیادی هیدروژن سولفید تولید کند. این محیط کشت، محیط کشتی حساس به سالمونلاهای تخمیرکننده لاکتوز و سالمونلاهای غیرتخمیرکننده لاکتوز می‌باشد. خیلی از نژادی این گروه، لاکتوز را خیلی سریع تخمیر کرده و بنابراین تولید H2S روی Triple Sugar Iron Agar  سرکوب می‌شود؛ بنابراین این امکان وجود دارد که موجوداتی که در غذاها باعث مسمومیت غذایی می‌شوند نادیده گرفته شوند. آمینه شدن لیزین باعث اسیدی شدن محیط و قرمزشدن آن می‌شود. باسیل‌های روده‌ای در محیط کشت، هیدروژن سولفید تولید می‌کنند و رنگ محیط را سیاه کرده؛ ولی اگر ارگانیسم‌ها، لیزین دکربوکسیلاز تولید کنند، PH محیط افزایش‌یافته و محیط قلیایی شده و به رنگ ارغوانی دیده می‌شود.

ترکیبات محیط کشت Lysine Iron Agar

• پپتون ۵٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• عصاره مخمر ۳٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• دکستروز (گلوکز) ۱٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• L-لایزین ۱۰٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• فریک آمونیوم سیترات ۰٫۵۰۰ گرم بر لیتر
• سدیم تیوسولفات ۰٫۰۴۰ گرم بر لیتر
• بروموکروزول بنفش ۰٫۰۲۰ گرم بر لیتر
• آگار ۱۵٫۰۰۰ گرم بر لیتر
• PH نهایی در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد باید حدود ۶٫۷ باشد.

ویژگی‌های محیط کشت لیزین آیرون آگار

• تفکیک ارگانیسم‌ها بر اساس توانایی دآمینه یا دکربوکسیله کردن لیزین
• رنگ قرمز محیط کشت به معنای اسیدی و رنگ ارغوانی به معنای بازی بودن آن می‌باشد.
• این محیط کشت ترکیبی از مواد مغذی مختلف می‌باشد.

کاربردهای محیط کشت لیزین آیرون آگار

• تشخیص ارگانیسم‌های روده‌ای
• شناسایی باکتری اشرشیا ای کولای (coli)
• آشکارسازی فوری تولید H2S در محیط کشت
• مناسب برای تمایز پروتئوس (Proteus) و سالمونلا (Salmonella)

اجزای تشکیل‌دهنده محیط کشت لیزین آیرون آگار

• پپتون
• عصاره مخمر
• دکستروز (گلوکز)
• L_لایزین
• فریک آمونیوم سیترات
• سدیم تیوسولفات
• بروموکروزول بنفش
• آگار

روش تهیه و ساخت محیط کشت لیزین آیرون آگار

• در ابتدا مقداری از محیط کشت را در یک لیتر آب مقطر مخلوط می‌کنیم.
• آب را داغ می‌کنیم تا محیط کاملاً حل شود.
• محیط کشت را در لوله‌ها پخش کرده و در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه اتوکلاو می‌کنیم.
• لوله‌ها را در حالت مایل، خنک می‌کنیم.
• با یک سوزن تلقیح مستقیم، با برداشت یک کلنی از یک کشت خالص، حفره عمقی در محیط کشت ایجاد می‌کنیم.
• لوله را محکم بسته و به مدت 18 تا 24 ساعت در دمای 35-37 درجه سانتیگراد در هوای محیط، انکوبه می‌کنیم.
• پس از گذشت 48-24 ساعت محیط کشت را از نظر رشد و تغییر رنگ بررسی می‌کنیم.

تفسیر نتیجه کشت لیزین آیرون آگار

• مشاهده رنگ سیاه: محیط کشت حاوی باسیل‌های روده‌ای می‌باشد.
• مشاهده رنگ ارغوانی در ته لوله: محیط کشت حاوی باکتری‌های ترشح‌کننده لایزین دکربوکسیلاز
• مشاهده رنگ قرمز: محیط کشت حاوی باکتری‌های دآمینه کننده لایزین