توضیحات

تست MTT  به‌عنوان سنجشی برای بررسی میزان زنده ماندن سلول یا بررسی اثر سمیت داروها و دیگر مکمل‌ها بر سلول است که با تأثیر بر روی اندامک‌های درون‌سلولی می‌تواند بین سلول زنده و مرده تمایز قائل شود. فعالیت و سرعت تکثیر سلول‌ها ممکن است تحت‌تأثیر هورمون‌ها، فاکتورهای رشد، سایتوکاین‌ها و میتوژن‌ها افزایش داشته باشد یا تغییری نکند. همین‌طور بعضی از داروها و عوامل سایتوتوکسیک مثل داروهای ضدسرطان ممکن است باعث نکروز یا آپوپتوز سلول‌ها یا کاهش سرعت تکثیر و رشد و یا ازبین‌رفتن ساختار سلول‌ها شود.  مواد نمونه، سلول‌های چسبنده یا سوسپانسیون هستند که در میکروپلیت‌های 96 چاهی کشت شده‌اند.

مکانیسم

MTT یک روش رنگ‌سنجی است که بر اساس احیا شدن و شکسته شدن کریستال‌های زردرنگ تترازولیوم به وسیله‌ی آنزیم سوکسینات دهیدروژناز و تشکیل کریستال‌های بنفش رنگ نامحلول انجام می‌شود. در این روش برخلاف سایر روش‌ها مراحل شستشو و جمع‌آوری سلول که اغلب باعث ازدست‌رفتن تعدادی از سلول‌ها و افزایش خطای کار می‌شود، حذف شده و تمام مراحل آزمایش از ابتدای کشت سلول تا خواندن نتایج با فوتومتر و همچنین تفسیر این تست در یک میکروپلیت انجام می‌شود، بنابراین تکرارپذیری، دقت و حساسیت آزمایش بالاست.

به‌عبارت‌دیگر اساس این تست، احیای MTT به ماده رنگی نامحلول فرمازان از فعالیت گلیکولیتیک در داخل سلول است و به حضور NADH و NADPH بستگی دارد (بنابراین با فعالیت متابولیک میتوکندری ارتباط دارد). در سلول‌های به طور فعال تکثیر شونده، افزایش تبدیلMTT  از طریق اسپکتروفوتومتر اندازه‌گیری می‌شود.

نکات تکمیلی

• کیت در 4 درجه سانتیگراد و دور از نور نگهداری شود.
• در صورت نگهداری صحیح، محتویات کیت برای 12 ماه پایدار می‌ماند.
• از پلیت 96 چاهک ته‌گرد برای سلول‌های غیرچسبنده به بستر و پلیت 96 چاهک ته صاف برای سلول‌های چسبیده به بستر استفاده کنید.
• حضور فنول قرمز در آزمایش نهایی به‌شدت بر نتایج تأثیر می‌گذارد. در صورت امکان اکیداً توصیه می‌شود سلول‌ها در محیط فاقد فنول قرمز (موجود در کیت) کشت شود.

مطالب مرتبط

None found