توضیحات

محیط کشت میکروبی MKTTN براث که به نام محیط کشت مولر کافمن تتراتیونات نووبیوسین (Mueller Kauffman Tetrathionate Novobiocin Broth) نیز شناخته می‌شود، مناسب برای غنی‌سازی کشت و جداسازی سالمونلا طراحی شده است. آزمایش انواع مختلف تولیدات غذایی برای بررسی حضور سالمونلا نیازمند متدهای مختلفی می‌باشد که این متدها در آزمایشگاه‌های بالینی انجام می‌شوند. نیاز به بعضی تست‌ها بر اساس تعداد اندک سالمونلا در غذاها و همچنین وضعیت ضعیف این میکروارگانیسم بیماری‌زا از نظر فیزیولوژیکی می‌باشد که آن هم به این دلیل است که این میکروارگانیسم در طول پروسه آماده‌سازی غذاها در معرض شرایط استرس‌زا قرار می‌گیرند می‌باشد. سالمونلاهای آسیب‌دیده، در محیط کشت غیرانتخابی براث احیاء می‌شوند.

پیش غنی‌سازی محیط معمولاً در دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد و به مت ۱۸ تا ۲۴ ساعت انکوباسیون انجام می‌شود. معمولاً ۱ میلی‌لیتر از محیط کشت پیش غنی شده به ۹ میلی‌لیتر محیط کشت براث غنی شده انتخابی تلقیح می‌شود. محیط کشت انتخابی، عناصر انتخابی دارد که به سالمونلا اجازه رشد داده و جلوی رشد میکروارگانیسم‌های دیگر را که با سالمونلا رقابت می‌کنند می‌گیرد.

ترکیبات محیط کشت MKTTN

• بافت حیوانی هضم شده پپتیک ۴٫۳۰۰ گرم بر لیتر
• کازئین هیدرولیز شده (آنزیمی) ۸٫۶۰۰ گرم بر لیتر
• Ox bile 4.750 گرم بر لیتر
• سدیم کلرید ۲٫۶۰۰ گرم بر لیتر
• کلسیم کربنات ۳۸٫۷۰۰ گرم بر لیتر
• سدیم تیوسولفات، پنتاهیدرات ۴۷٫۸۰۰ گرم بر لیتر
• بریلینت گرین ۰٫۰۰۹۵ گرم بر لیتر
• PH نهایی در دمای ۲۵ درجه، حدود ۸٫۲ باید باشد.

ظاهر محیط کشت MKTTN

پودر همگن کرم رنگ که مایل‌به‌سبز – زرد می‌باشد.

طرز تهیه کلی محیط‌های کشت 

1. همان‌طوری که می‌دانید محیط‌های کشت به سه دسته جامد، نیمه جامد، مایع تقسیم می‌شوند. محیط‌های مایع معمولاً فاقد آگار هستند یا مقدار آگارشان بسیار کم است. مثلاً حدود (۲/۰%) و محیط‌های نیمه جامد دارای مقدار کمی آگار حدود ۳- ۲ گرم و بالاخره محیط‌های جامد که دارای ۱۵- ۱۳ گرم آگار در لیتر محیط هستند .
2. برای ساختن محیط‌های کشت باکتری، از پودر مخصوص که در شیشه‌های مربوطه قرار دارد، استفاده می‌کنیم.
3. در روی این شیشه‌ها ترکیب محیط به طور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است.
4. مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده و در مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته‌اید اضافی نموده و آن را کاملاً‌ حل نمایید.
5. سپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه‌پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید.
6. تا زمان جوشیدن آن را چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و به مدت یک دقیقه بجوشد.
7. پس از آنکه مایع بجوش آمد، آن را برداشته وبا تکه کاغذ آلومینیومی روی پنبه را می‌پوشانید .
8. ظرف را در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود.
9. بعد از استریل کردن بگذارید تا حدود c45⁰– 40 خنک شود .
10. سپس درحالی‌که ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آن را با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید.
11. محتویات را درون پلیت‌های استریل شده بین ^cc20- 15 از محل محلول بریزید.
12. بعد پلیت‌ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند و از تکان دادن آن خودداری نمایید.
13. پس از جامد شدن محیط‌های کشت نوترینت آگار را جمع کرده و در c37⁰ به مدت ۲۴ ساعت قرار دهید.
14. اگر محیط‌ها آلوده نشده باشند آنها را از c37⁰ بیرون بیاورید.
15. در یخچال ۴ درجه سانتی‌گراد قرار می‌دهید.