توضیحات

ویژگی ها و کاربرد های رنگ Oil-Red-O ایده زیست نوترکیب

رنگ Oil-Red-O یک لیزوکروم (رنگ چربی) محلول در چربی است که حلالیت بسیار بیشتری در مواد لیپیدی نسبت به حلال های رنگی هیدروالکلی رایج دارد. این ماده برای رنگ آمیزی لیپیدها، اسیدهای چرب، تری گلیسریدها و کلسترول در نمونه های بافتی منجمد، برش های بافتی، و کشت های تک لایه آدیپوسیت بکار می رود. اگرچه عمق رنگ قرمز این ماده زیاد است اما ساختارهای سلولی در آن واضح می مانند. در اثر عبور نور قرمز و  تهییج آن بواسطه داشتن خاصیت فلورسانس، سلول ها و برش های رنگ آمیزی شده قابل رویت می شوند. در کشت سلول، رنگ Oil-red-O رایج ترین رنگ برای دیدن و شمارش تمایز آدیپوژنیک سلول های بنیادی مزانشیمی در سیستم برون تنی است. قطرات روغن در آدیپوسیت های بالغ رنگ را گرفته و بصورت قرمز دیده می شوند.

• ظاهر: مایع قرمز
• وزن مولکولی: 49/408
• فرمول مولکولی: C26H24N4O
• اندیکاتور پی اچ: 6/4 (زرد) تا 6 (قرمز)
• تست شده از نظر کشت سلولی
• عمر مفید: یک ماه
• نگهداری: 30-10 درجه سانتیگراد

روش آماده سازی و استفاده از رنگ Oil-red-O 

• 6 قسمت از ذخیره اصلی رنگ Oil-red-O (BI-1802) را با 4 قسمت آب مقطر مخلوط کنید و بگذارید 20 دقیقه در دمای اتاق بماند

1. سلول های کشت شده را وارد پلیت کشت سلول کشت کرده و بر اساس پروتوکل، تیمار کنید.
2. پلیت 35 میلی متری را از انکوباتور بیرون آورده و محیط را خارج کنید.
3. مقدار 2 میلی لیتر PBS برای شستشوی سلول ها اضافه و سپس بطور کامل آن را خارج کنید.
4. مقدار 2 میلی لیتر فرمالین 10 درصد (دمای اتاق) اضافه کرده و برای10دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.
5. فرمالین را دور ریخته و 2 میلی لیتر فرمالین تازه اضافه کرده و برای یک ساعت یا بیشتر انکوبه کنید (قبل از رنگ آمیزی میتوان سلول ها را تا دو روز در فرمالین نگه داشت. در پارافیلم بپیچید و با یک فویل آلومینیومی بپوشانید تا سلول ها خشک نشوند).
6. فرمالین را با پیپت بردارید.
7. سلول ها را دو بار با 2 میلی لیتر آب مقطر دو بار تقطیر شستشو دهید.
8. سلول ها را با 2 میلی لیتر ایزوپروپانول 60 درصد برای 5 دقیقه در دمای اتاق شستشو دهید.
9. اجازه دهید سلول ها بطور کامل در دمای اتاق خشک شوند. در صورت امکان از دستگاه سشوار استفاده کنید.
10. یک میلی لیتر از محلول کاریOil Red O اضافه کرده و10دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.
11. رنگ Oil Red O را دور ریخته و بلافاصله با آب مقطر دو بار تقطیر بشویید. شستشو را 4 بار تکرار کنید.
12. برای بررسی با میکروسکوپ عکس بگیرید.
13. تمام آب را بردارید و اجازه دهید خشک شود.

14. با افزودن ایزوپروپانول 100 درصد و انکوباسیون برای 10 دقیقه با تکان دادن ملایم، رنگOil Red O را خارج کنید.
15. چندین بار ایزوپروپانول را باOil-Red-O پیپت کنید تا مطمئن شوید تمام رنگ Oil Red O در محلول قرار دارد.
16. محلول را به یک تیوب 5/1 میلی لیتری منتقل کنید.
17. با استفاده از ایزوپروپانول 100 بعنوان بلانک، جذب نوری را در500 نانومتر قرائت کنید.

کاتالوگ Oil Red O

• دریافت کاتالوگ رنگ Oil-Red-O ایده زیست نوترکیب (فارسی)
• دریافت کاتالوگ رنگ Oil-Red-O ایده زیست نوترکیب (انگلیسی)

ارجاعات

1. Hashemitabar, Mahmoud, et al. “Isolation and Characterization of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells and Their Differentiation into Pdx-1+ Cells.” Journal of Biomedical Science and Engineering 8.11 (2015): 780.
2. Alizadeh, Effat, et al. “The effect of dimethyl sulfoxide on hepatic differentiation of mesenchymal stem cells.” Artificial cells, nanomedicine, and biotechnology 44.1 (2016): 157-164.